恶性实体瘤患者自体cik细胞的体外扩增及初步临床应用.docx

恶性实体瘤患者自体CIK细胞的体外扩增及初步临床应用姓名:李灿班级:国贸1101学号:20111548【摘要】目的观察恶性实体瘤患者外周血来源的细胞因子诱导杀伤细胞(CIK)在自体血浆中的增殖特性,回输治疗的安全性及近期疗效。方法用淋巴细胞分离液分离获取40例恶性实体瘤患者外周血单个核细胞,无血清培养基中添加rhIFN-γ、Anti-CD3mAb和rhIL-2联合诱导单个核细胞为CIK细胞。在培养第13天进行细胞计数,通过流式细胞术检测细胞免疫表型,并将细胞进行自体回输。结果40例恶性实体瘤患者回输自体CIK细胞后,PR6例,MR13例,SD9例,PD12例,治疗总有效率为45%,%。多数患者一般情况明显改善;治疗后T细胞亚群中CD3+、CD4+细胞及CD4+/CD8+比值及NK细胞计数较治疗前显著升高。治疗过程中出现8例低热,2例高热,未观察到其它明显的毒副作用。结论恶性实体瘤患者自体血浆扩增CIK细胞,回输治疗安全有效,且无明显的毒副作用【关键词】细胞因子诱导的杀伤细胞;免疫治疗;恶性肿瘤近年对恶性肿瘤的综合治疗方案在临床上已得到广泛认同。其中,细胞过继免疫治疗是将具有强大杀瘤活性的免疫细胞在体外扩增后回输给患者的治疗方法,已成为继手术、放疗、化疗后对肿瘤患者进行综合治疗的重要手段之一。CIK细胞是在体外应用多种细胞因子和CD3mAb刺激诱导恶性肿瘤患者外周血单个核细胞而获取的异质细胞群,兼有T细胞强大的杀瘤活性和NK细胞的非主要组织相容性复合物(MHC)限制的杀瘤特点,故又称为NKT样细胞。本研究通过在体外扩增40例恶性实体瘤患者外周血来源的CIK细胞,,并进行自体回输,探索恶性实体瘤患者自体CIK细胞临床应用的安全性及近期疗效,为自体CIK细胞过继免疫治疗在临床的推广应用积累一些有益经验。1 临床资料40例均为山东省千佛山医院2007年1月至2008年12月住院的恶性实体瘤患者,所有病例均经病理或细胞学检查确诊,分期Ⅱ~Ⅳ期。其中,男性22例,女性18例,年龄为34~74岁。大肠癌8例,乳腺癌8例,肺癌6例,肝癌6例,胃癌4例,肾透明细胞癌3例,口腔鳞癌2例,前列腺癌2例,卵巢癌1例。Kamofsky评分>60分,预计生存期大于3个月,治疗前心、肝、肾功能及血常规大致正常。末次化疗时间距本次治疗间隔1月以上,并排除心、肺、肝、肾功能不全者及对生物制品敏感者。所有患者或家属均已签署DC-CIK细胞治疗知情同意书,并报医院伦理委员会批准。并接受DC-CIK细胞治疗。于2008年2月至2008年12月接受自体CIK细胞治疗共1疗程。 主要材料GT-T551无血清培养基(日本TAKARABIO公司),鼠抗人抗CD3单抗(),DMEM培养基、Ficoll液、HEPES液及PBS缓冲液(均为美国SIGMA公司),基因重组人干扰素γ(IFN-γ)(上海生物制品所),重组人白细胞介素2(IL-2)(山东泉港药业有限公司),重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和IL-4(购自厦门特保生物工程股份公司),本研究使用的双色荧光抗体均是FITC和PE标记的鼠抗人单克隆抗体,包括CD3、CD4、、CD8、CD56、CD80等(晶美生物工程有限公司)。流式细胞仪FACSCalibur(美国BD