医疗器械无菌检查.pptx

医疗器械无菌检查
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主要内容
无菌定义及无菌检查定义
无菌检验依据
试验主要设备
实验环境条件及人员要求
培养基种类及配制要求
培养基适用性检查
试验菌种及菌液制备
无菌检查方法验证
供试品无菌检查及结果判断
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无菌MCC(B)64941]
白色念珠菌[CMCC(F)98001]
黑曲霉[CMCC(F)98003]
菌种的要求： 不得超过5代。采用适宜的方法保存；并以保证试验菌株的生物学特性。
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（6）培养基适用性检查
菌液制备
一般当日使用。
取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌，少许接种至营养肉汤基中，生孢梭菌的新鲜培养物少许接种至硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18 ～24h；
白色念珠菌的新鲜培养物接种改良马丁培养基中， 23～28℃培养24 ～48h，%无菌***化钠溶液制成含菌量小于100cfu/ml菌悬液；
黑曲霉 菌斜面的新鲜培养物接种至改良马丁琼脂斜面培养基上， 23～28℃培养5 ～ 7天，使大量的孢子成熟。加入3～ %（ml/ml）%无菌***化钠溶液，将孢子洗脱。然后用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管中，%（ml/ml）%无菌***化钠溶液制成小于100cfu/ml 的孢子悬液。（见表）
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（6）培养基适用性检查
《中国药典》2010年无菌检查验证试验中使用7株菌见下表
菌 种
接种培养基
培养温度℃
培养时间
金黄色葡萄球菌
营养肉汤或者普通斜面
30～35
18～24h
铜绿假单孢菌
枯草芽孢杆菌
大肠埃希菌 （无）
生孢梭菌
硫乙醇酸盐培养基
白色念珠菌
改良马丁或者普通斜面
23～28
24～48h
黑曲霉
改良马丁斜面
23～28
5～7d
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（6）培养基适用性检查
培养基接种
　　　　　　　　　　　金黄色葡萄球菌2支
铜绿假单胞菌2支
硫乙醇酸盐流体培养基 枯草芽孢杆菌2支
生孢梭菌2支
9支培养基装量12ml，空白对照1支。
分别接种小于100cfu/ml金葡、铜绿、枯草、生孢各2管，另1支不接种做空白对照，培养3天，逐日观察结果。
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（5）培养基适用性检查
培养基接种
　　　
白色念株菌2支　
　　改良马丁培养
黑曲霉2支　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　
（5支培养基装量9ml，其中1支做空白对照）

分别接种小于100cfu/ml白色、黑曲各两支，另1支不接种做空白对照。培养5天，逐日观察结果。
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（6）培养基适用性检查
结果判断
空白对照管应无菌生长，若加菌的培养管均生长良好，判该培养基的灵敏度检查符合规定。
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（7）试验(验证)菌种及菌液制备
菌种：试验用菌株及菌液制备：
金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003
大肠埃希菌[CMCC(B)44102]
枯草杆菌[CMCC(B)63501]
生孢梭菌[CMCC(B)64941]
白色念珠菌[CMCC(F)98001]
黑曲霉[CMCC(F)98003]
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（6）试验菌种及菌液制备
10倍梯度稀释
选择适宜的3个稀释级别
要求＜100cfu/ml
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（7）无菌检查方法验证
验证准备条件：
稀释液、冲洗液及其制备方法
％蛋白胨水溶液
***化钠—蛋白胨缓冲液
制备的菌液，应当日使用。
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（7）无菌检查方法验证
目的:
证明所采用的方法适合于该供试品的无菌检查
确认供试品在该实验条件下无抑菌活性或其抑菌活性可以忽略不计。
确保在实际检验条件下，该供试品的无菌检查法的准确性、有效性和重现性。 验证时，按“供试品的无菌检查”的规定及下列要求进行操作。对每一试验菌应逐一进行验证。
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（7）无菌检查方法验证
菌种及菌液制备 ：除大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC(B) 4 4102〕外，金黄色葡萄球菌 、 枯草芽孢杆菌  、 生孢梭菌、 白色念珠菌、黑曲霉同培养基灵敏度检查。大肠埃希菌的菌液制备同金黄色葡萄球菌。

方法验证试验与灵敏度检验所有菌种区别：大肠埃希菌代替铜绿假单胞菌。
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（7）无菌检查方法验证
菌液制备：
金黄色葡萄球菌（大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌) 接