银杏叶提取物对荷瘤小鼠免疫功能的影响.docx

银杏叶提取物对荷瘤小鼠免疫功能的影响.doc银杏叶提取物对荷瘤小鼠免疫功能的影响
【摘要】 目的通过药理实验证明,银杏叶提取物对荷瘤小鼠免疫功能的影响,从而筠说明银杏叶提取物能提高机锱体的免疫功能。方法通过对梧荷瘤小鼠胸腺指数、淋巴细皱胞转移功能、NK细胞活性、TNF活性、IL-2诱琮生水平等免疫指标的测定,尘从而得出银杏叶提取物对机坚体免疫功能的影响。结果证明银杏叶提取物具有增强机陆体的免疫功能的作用。结论畚银杏叶提取物可显著提高荷旧瘤小鼠的淋巴细胞转化功能〉;低剂量可增强NK细胞活骖性;可显著增强TNF活性枘,且具有剂量依赖性;可显莠著增强IL-2的诱生水平,且具有剂量依赖性
【关┼键词】 银杏叶提取物S1H80细胞血清药理学杀伤细痘胞天然肿瘤坏死因子白介素垸2
银杏叶为银杏科银杏属蛊植物银杏的叶子。秋季采集,晒干。气微,味微苦。归佘心、肺经。传统上用于治疗霎冠心病、心绞痛、高血脂等趟症。主要化学成分为黄***类碹、内酯类化合物。近几年研苣究报道银杏叶提取物不但具饮有扩张血管的作用,还有抗蚪炎、镇痛、抗衰老、降血脂鹅、抗肿瘤作用,许多医药学啤古籍记载了银杏叶具有治疗酋膀胱肿瘤和消化道肿瘤的作牾用。民间就有食用银杏叶治疗癌症的做法。本组用荷瘤汊小鼠做实验,探讨银杏叶提堪取物对机体免疫功能的影响
及其作用机制。
1 仪器阪与材料
光学显微镜:日本捡Olympus;高速离心倜机:日本SAKURA;电嫫磁搅拌机:日本SAKUR酗A;电子天平:沈阳龙腾称竟量仪器有限公司;CO2孵濠箱:美国Backtel型匦号WJ-301T;RPM膘I-1640培养基:美国填GIBCO公司;S180璋细胞:延边大学药学院药理艴教研室;昆明种小白鼠:延胨边大学药学院实验动物中心婚;新生小牛血清:北京鼎国安生物技术有限公司;二***范亚砜:Sigma公司;刀╊豆蛋白A:Sigma公司按;四***偶氮唑盐:Gen弯view公司;胰蛋白酶:莰Genview公司。
2嵬 方法
21 银杏叶提鱿取物的制备 取秋季新采集须已晒干的银杏叶2kg,切绠碎,以95%乙醇10000ml浸泡过夜,再加热至涫60℃,温浸5h,倒出提缕取液,再加入95%乙醇1猝0000ml重复提取一次肆,然后再用70%乙醇10觜000ml煮沸一次,保持女沸腾约2h,将三次提取所鳙得浸出液合并后减压浓缩,得棕绿色黏稠液状的总浸膏肷。总浸膏加适量水溶解,分忄别以石油醚、***仿、乙酸乙螭酯萃取。每溶剂萃取4次,每次1000ml。分别得传石油醚萃取物kg,***仿萃漾取物kg,乙酸乙酯萃取物拿kg。取乙酸乙酯萃取物溶脯解后上硅胶柱,以***仿-甲
酲醇洗脱,分别收集绿色、黄钗绿色、红色、棕色和褐色五您条色带的流份做初步的细胞痖毒性实验,结果以红色流份ボ的抑制细胞增殖效果最为明擢显,因此将红色流份作为本希实验的有效成分,将其收集于旋转蒸发瓶中蒸干,过滤蜃除菌,备用。
22 小文鼠胸腺指数的测定[1] 鲵将小鼠处死,取胸腺称重,氆计算胸腺指数。
23 搿小鼠脾细胞悬液的制备[2讵] 将小鼠处死,取脾脏,撖研磨,沙网过滤,加入红细︻胞裂解液,裂解3min,1500r/min离心8辋min,取出淋巴细胞,生邛理盐水冲洗2次,
作者单汶位:1134300吉林白山,白山市食品药品检验所
2134300吉林白山,蠢白山市中心医院
800r号/min离心10min,曳用RPMI-1640培养Ⅳ液调细胞浓度为5×106科/ml,37℃5%CO2锬饱和湿度培养,备用。
2夙4 淋巴细胞转化功能的鸥测定[2] 将制备的小鼠毵脾细胞悬液用含10%小牛х血清的RPMI-1640培养液调整细胞浓度为5×吵106/ml,加入于96诼孔培养板,100μl细胞ァ悬液/孔。加入浓度为μl孥/ml的ConA,100μl/孔,于37℃5%CO2培养箱内培养48h后桌,弃上清,每孔加入MTT鸩试液10μl,继续培养4
冒h,弃上清,每孔加入DMSO100μl,振荡10伧min,用酶联免疫检测仪****测在570nm处测吸收度囫。
25 NK细胞活性┽的测定[3] 采用MTT方法测定,将制备的脾细胞皱悬液调浓度为×106/m宋l。取传代两次且生长良好酎的靶细胞Yac-1,用培养液调浓度为×105/m炽l,使得效应细胞和靶细胞母的比例为25∶1。将两种劈细胞接种于96孔培养板,﹁每只小鼠脾细胞悬液均设3☆孔,其中2孔加入效应细胞′和靶细胞,各100μl,缸另1孔为效应细胞对照,加枵入效应细胞和RPMI-1640各100μl。整批姊实验还设3孔靶细胞对照,颚加入靶细胞和RPMI-1俎640各100μl。上述阐各孔于37℃5%CO2条吸件杀伤4h后,弃上清,每必孔加入MTT试液10μl,继续培养4h,弃上清,每孔加入DMSO100μ