紫外仪器分析.ppt

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高效液相色谱梯度洗脱法同时测定阿魏酸和天麻苷的含量
阿魏酸( Ferulic acid)
具有抗动脉粥样硬化;抗血小板凝集和血栓;清除亚***盐、氧自由基、过氧化亚硝基;抗菌消炎; 抗肿瘤;抗突变等功能
天麻苷(Gastrodin)
具有抗惊厥、镇静催眠、镇痛、改善心血管系统、延缓衰老、降低血压和外周血管阻力,增加动脉血管中血流惯性,以及中央和外周动脉血管的顺应性等药理活性
Waters高效液相色谱仪(W2695泵、W2996DAD
检测器、自动进样器、Empower化学工作站)
色谱柱: Symmetry C18 柱( 3. 9mm ×150mm,
5μm) ;流动相:甲醇- 1%冰醋酸溶液梯度洗脱;柱温: 25℃。
270 nm 标准品
323 nm 标准品
270 nm 样品
323 nm 样品
第八章紫外-可见吸收光谱分析
(Ultraviolet and Visible Spectrophotometry, UV-Vis)
概述 Principles of UV
紫外-可见吸收光谱法是利用某些物质的分子吸收200~800nm光谱区的辐射来进行分析测定的方法。这种分子吸收光谱产生于价电子和分子轨道上的电子在电子能级间的跃迁,广泛用于有机和无机物质的定性和定量测定。
过程:运动的分子外层电子---吸收外来辐射---产生电子能级跃迁---分子吸收谱。
物质分子内部三种运动形式:
(1)电子相对于原子核的运动;
(2)原子在其平衡位置附近的相对振动;
(3)分子本身绕其重心的转动。
分子具有三种不同能级:电子能级、振动能级和转动能级
三种能级都是量子化的,且各自具有相应的能量。
分子的内能:电子能量Ee 、振动能量Ev 、转动能量Er
即: E=Ee+Ev+Er
ΔΕe>ΔΕv>ΔΕr
讨论:
(1)转动能级间的能量差ΔΕr: ~
需吸收波长约为250-25m的远红外光
吸收光谱位于远红外区
形成的光谱称为远红外光谱或分子转动光谱;
(2)分子的振动能级差: - 1 eV
需吸收波长约为25 -m的红外光
在分子振动时同时有分子的转动运动。
由于它吸收的能量处于红外区,故称红外光谱
(3)电子的跃迁能差约为1-20 eV
- m
主要在真空紫外到可见光区,对应形成的光谱,称为电子光谱或紫外、可见吸收光谱
The shape of UV adsorption curve
The adsorption bands are broad because each electronic energy level has multiple vibrational and rotaional energy levels associated with it.
Excitation from the ground electronic state can occur to more than one vibrational level and rotatioal sublevels.
Lambert-Beer 定律
当入射光波长一定时,待测溶液的吸光度A与其浓度和液层厚度成正比,即
k 为比例系数,与溶液性质、温度和入射波长有关。
当浓度以 g/L 表示时,称 k 为吸光系数,以 a 表示,即
当浓度以mol/L表示时,称 k 为摩尔吸光系数,以表示,即
比 a 更常用。越大,表示方法的灵敏度越高。与波长有关,因此,常以表示。
紫外吸收曲线