1.2基因工程的基本操作程序2.ppt

基因工程的基本操作程序




什么是目的基因?
目的基因主要是编码蛋白质的结构基因
如:苏云金芽孢杆菌的抗虫基因,还有植物的抗病(抗病毒、抗细菌)基因、种子贮藏蛋白的基因,以及人的胰岛素基因等。


如何获得目的基因?
获得目的基因
从基因文库中获取(已有物种分离)
利用PCR技术扩增目的基因
人工合成
化学合成法和反转录法

(1)从基因文库获取目的基因
基因文库包括:
(1)基因组文库
(2)部分基因文库(如cDNA文库)
包含一种生物的全部基因
基因组文库
包含一种生物的部分基因
部分基因文库

(1)从基因文库获取目的基因
基因组文库

(1)从基因文库获取目的基因
什么是cDNA文库?
plementary)
mRNA
杂交RNA-DNA
单链cDNA
双链cDNA
反转录酶
核酸酶H
DNA聚合酶
转入受体菌
cDNA文库
单独DN***段不稳定,不能独立稳定遗传

(2)利用PCR技术扩增目的基因
什么是PCR技术?
PCR全称聚合酶链式反应,是一项在体外复制特定DN***段的核酸合成技术。
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:
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DNA复制
已知目的基因的核苷酸序列、一对引物、四种脱氧核苷酸、DNA聚合酶等
指数
以_____形式扩增,即____(n为扩增循环的次数)
短时间内大量扩增目的基因
2n
8
利用PCR技术扩增目的基因
9

(2)利用PCR技术扩增目的基因
PCR过程
a、DNA变性(90℃-95℃):双链DNA模板
在热作用下,_____断裂,形成___________
b、退火(复性55℃-65℃):系统温度降低,引物与DNA模板结合。
c、延伸(70℃-75℃):在Taq酶的作用下,从引物的5′端→3′端延伸,合成与模板互补的DNA链。
氢键
单链DNA