28个肿瘤相关基因启动子CpG岛甲基化及转录与非小细胞肺癌的相关性的研究.pdf

复旦大学
博士学位论文
28个肿瘤相关基因启动子CpG岛甲基化及转录与非小细胞肺癌的
相关性的研究
姓名:杨振华
申请学位级别:博士
专业:呼吸内科
指导教师:蔡映云
20040428
摘要实验目的:目前关于肺癌发生机制的研究主要集中于分子和细胞生物学水平,包括抑癌基因在内的相关基因的失活在非小细胞肺癌姆⑸⒄构程中发挥重要作用。基因的失活方式有很多,而启动子旱囊斐<谆艿越来越多的重视。最近的研究证实启动子杭谆赡茉贜发生发展过程中都发挥重要作用,并且是导致抑癌基因失活的重要机制。本实验通过检测个肿瘤相关基因启动子杭谆切∠赴伟┌┳橹桶┡宰橹以及例良性肺部疾病肺组织中的发生率,探讨上述基因的甲基化与性别、年龄、吸烟、细胞病理类型、细胞分化程度及俅卜制诘墓叵担较为完整的相关基因甲基化谱,为临床早期诊断峁├砺垡谰荨N颐腔乖例肺癌细胞株检测了发生甲基化的细胞抹的转录水平,并与去甲基化的基因对照,进一步阐明基因启动子旱募谆雖B妓街涞墓叵怠实验方法:应用酚/氯仿法按常规抽提组织的基因组橇蛩嵫未恚应用甲基化特异的—甅椒ḿ觳齆癌组织、癌旁组织及肺部良性疾病的肺组织个基因的甲基化发生率。将回收,应用腺病毒载体构建重组体导入大肠杆菌中,培养后挑选克隆测序,同时测定甲基转移酶处理良性肺部疾病基因组笤俅尾舛ḿ谆化状态。伟┫赴闟—、一、虯闯9娣椒ǜ此眨ù胞株,应用酚/氯抽提细胞蚑抽提舛龌蚍⑸募谆化的状态,选择有意义的基因应用检测转录水平。实验结果:我们共检测了、、、猚、、、虲一个基因的甲基化发生情况,我们发现、一馈、、一龌蛟赗和良性肺部疾病的肺组织均未发生甲基化,而蚆贜和良性肺病组织中都发生了甲基化,包括、、、狟、蚈龌蛟诜伟┗蛘甙┡宰橹蟹⑸思基化而在良性肺部疾病肺组织中无甲基化发生。这些基因在癌组织和癌旁组织的甲基化率分别是ビィ珼ズィ珹为%和%,为%和%,为%和%,ズァ为%和%,衔ズィ琑为%和%,为%和%,ズ%,为%弄%,为%年%,为%;和外其余个基因都是癌组织的甲基化率高于癌旁组织,并且在ィ鼳、个肿瘤相关基因启动子杭谆白B加敕切∠赴伟┫喙匦缘难芯、、、、一、、
。男性和女性的甲基化率分别是ビィ珼ズィ珹为%%,ッ珼%,为%和%,ズィ珻为%%和%,为%和%,为%和%,为%矛因基因男女甲基化率均无统计学差异。例茨炅洹旰岁分为两组,甲基化率分别是ビィ珼ズィ珹为%,ズィ琾ズィ琖为%和%,和%,%和儿%,ッ琭%,狟为%和%,和%,为%署%,为%丰%,为%年%,其中≤,个基因癌组织的甲基化率分别是ビ%,为%署%,ズィ琈为%和%,为%和%.ナ餹%,ズィ琈%和%,%,其中吸烟史组甲基化率高于无吸烟史组,%和ィ琈为%%,为%和%,ズィ珻为%年和%,ズィ琑—ズィ琾为%干和%,为%并%,其中、、和腺癌组的甲基化率高于鳞癌组,牟钜炀哂型臣蒲б庖而、、、郯┳榈募谆率高于腺癌组,但差异均未达到统计学意义。例粗琢鱿赴只潭分为好、中等、差三组,其甲基化率分别是ァズィ珼ァ%,为%、%和%,为ァズィ蠖嗍基因都表现为肿瘤细胞分化越差其甲基化率越高。、、,。例碩分期分为ⅰА谄浼谆史直鹗荅为%、%%,为%、%和%,为%、%和%,ァズィ琾ァズィ琖为%、%和%,ァッ琔%,为%、%和%,和%。为%平%,ズィ琑—ズィ琾为%。个基ズ和%,为%和%,%,为%和%,为%和%.为%干%,为%%,为%%芹%,%、%和%,ァズィ琾ァ和%,ァ%,ァジ蒮%,为%、%和%,ァズィ琑—%、%干%,狶ァッ琔为%、%干个肿瘤相关基吲启动子杭谆巫B加敕切∠赴卑┫喙劂难芯%,
关键词:肺癌细胞株非小细胞肺癌为%、%和%,狟为%、%和%,ァズィ珹%、%和%,为%、%和%,为%、%和%。个基因期三组的甲基化率,均无统计学差异。从样本的甲基化系数分析,我们发现年龄曜榧谆凳哂凇曜椋形淌纷榈募谆凳笥谖吸烟史组,女性的甲基化系数大于男性,腺癌组的甲基化系数大于鳞癌组,期随分期甲基化系数而降低,但均未达到统计学差异。而在细胞分化差组甲基化系数大于分化中等或分化好组,—觳例肺癌细胞株、—个基因的甲基化发生情况,选择了在不同细胞株甲基化状态存在差别的龌虬∕,、一、虲测定转录水平。我们发现、一蚏等龌虬樗婕谆姆⑸鋗B妓较陆祷虿转录。实验结论:、、、、、和等个基因在蟹⑸谆⑶壹基化的水平与肿瘤细胞分化程度密切相关,基因甲基化可使表达降低甚至不表达。肿瘤相关基因启动子甲基化个肿瘤相关摹闪启动子杭谆白B加敕切∠赴伟┫喙丶难绣
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