NF-κB调控氧化LDL激活系膜细胞TGF-β1转录的研究.pdf

复旦大学
博士学位论文
NF-κB调控氧化LDL激活系膜细胞TGF-β1转录的研究
姓名:兰洋
申请学位级别:博士
专业:肾脏内科
指导教师:吴兆龙
20031020
骺匮趸疞激活系膜细胞瓸B嫉难芯中文摘要血磷脂酰胆碱等,可促使肾小球细胞释放各种细胞因子、生长因子、以及趋化因外基质的合成和分解,调节细胞的生长和分化,参与机体的炎症反应、免疫反应泶锷系鳎硐殖銮看蟮闹孪宋饔茫合,、抗凋亡蛋白等基因的表达调控,如诱导型一氧化氮合酶—高脂血症是肾脏病发生和发展的高危因素之一。低密度脂蛋白琇脱趸偷兔芏戎鞍—与细胞膜上受体结合,或谘趸讨胁闹使趸锶缛子和粘附分子,导致肾小球炎症细胞侵入、肾小球固有细胞的生长增殖改变以及细胞外基质,的沉积。肾小球系膜细胞是肾小球中受外界刺激后的效应细胞和损伤后的修复细胞,参与肾病早期的细胞增殖和肾病馒性发展过程中的纤维化、硬化,在肾小球病变的发病机制及治疗研究中是重要的观察对象之一。在多种肾脏病的治疗研究中,转化生长因子的表达是衡量疗效的有效指标之一。瓸鹘谧畔赴和肿瘤的发生。肾脏病变时,畉促进拇罅亢铣桑种破浣到猓珽累积,促进肾脏病慢性进行性发展。南掠问录写罅康谋ǖ溃琓—,.和转录因子葾和榈寄康幕的转录和表达。目前,嫌问录谋ǖ啦⒉欢嗉鲈嗖∈盩一表达上调的确切机制亦未明确。是普遍存在的转录因子,在免疫和炎症反应中起着重要作用,参与许多细胞因子、粘附因子、细胞因子受体、趋化因,⒌ズ讼赴骰鞍祝:琁脱9芟赴掣椒肿樱一琕取博士研究生:吴兆龙教授肾脏病学目前瓸肫銲、:专业:,.一,
.韵的は赴鸑甂第一章钚缘挠跋疪是一个大的转录因子家族,在哺乳动物中有//、细胞传代后生长至%融合,随机分为正常对照组蚈甃刺激组。ü趸ㄖ票复碳の颫甃。提取细胞核蛋白,与眕鞯ヌ宓牡鞍妆泶锼接妹庖哂〖7析进行检测。实验结果经灰度扫描后表示为对照组的相对积分光密度值,统计分酝椿蛞煸炊厶逵氚谢蛏咸囟ǖ腄为嘌呤,`。炎症、免疫反应、氧化应激和许多细胞因子如肿瘤坏死因子,。肾小球系膜细胞中—约翱赡艿幕罨粕形醇ǖ馈蜕鲂∏蛳的は赴谏鲈嗨鹕酥兴鸬淖饔茫—艽碳ど鲂∏蛳的は赴腡—泶锷系鳎颐且郧暗氖笛橐餐察到,但其中的机制尚未完全明确,∏蛳膜细胞为研究对象,观察—谋浠⒍粤秸咧淇赡艽嬖诘关系做进一步的检测,探讨脂质肾损伤的发生机制。目的:∏蛳的は赴鸬腘甂鞯ヌ宓牡鞍妆泶锼礁谋洌⑷范ɑ罨腘甂械亩厶宄煞帧方法:肾小球系膜细胞从雄性大鼠分离培养,实验用代细胞。系膜押塑账崽秸敕从蠼心旱缬厩ㄒ坡适笛椋觳獠煌ǘ群钚缘谋浠阅旱缬境ㄒ坡亩厶宄煞帧甂析采用软件进行。结果:『6哉兆槊飨陨仙ɑ钚匀唇飨韵陆担诖碳ず又明显升高,.、、/—龋琋狵序列结合,调节基因的转录,浚特定序列称坏悖诵男蛄惺荊幕钚杂砂手械囊种品肿覫鹘冢甀蚥一茸槌桑琁肿拥腞相作用,—岷匣钚悦飨升高.,.碜棰篎常对照组:。..—及.—颉痬.、.
∥,激活剂预处理后不加—盏嫉腎蚰芗跞甃诱导蟮腘的刺激浓度的上升而升高。撼ㄒ坡适笛橄允荆尤雙、、甊、胶电泳时抗体加入后形成超阻滞条带,显示—,与凝胶超阻滞分析的实验结果相符。结论:—,。方法:系膜细胞传代后生长至%的融合状态,随机分为正常细胞组刺激组琌蛋白激酶抑制剂或蛋白激酶激活剂组,闹苯蛹せ罴、种萍、.。痬诱导系膜细胞几乎完全降解,然后开始重新合成,蠹创锏秸K健预处理系膜细胞后,—盏嫉腎到獗灰种啤预处理系膜细胞不能引起的降解,而蛴盏枷的は赴鸌的迅速降解,笸耆ń到猓然后又合成,蠡指吹秸K健.、、的抗体与核抽提物作用后,,、的蛋