小鼠睾丸支持细胞诱导小鼠胚胎干细胞向生殖细胞分化的实验研究.pdf

力·��学位论文作者签名:舟移��物雩致签字日期:�年��拢唬��签字日期:�年』月��签字日期:细�陏月;/日独创性声明���学位论文使用授权书声明��本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作。除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本人承担本声明的法律责任。学位论文作者签名:本人完全了解第二军医大学有关保留、使用学位论文的规定,有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人授权第二军医大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。�C艿难�宦畚脑�解密后适用本授权书�导师签名
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小鼠睾丸支持细胞诱导小鼠胚胎干细胞向生殖细胞分化的实验研究摘要研究背景和目的使研究者们把研究深度进一步加深,用�细胞作为生殖细胞分化的起始点。到方法:取�—�天雄性��∈蟮呢和瑁�赶��ㄔ��嘌�S肦�甈�的方法胚胎干细胞���哂腥�苄裕�芄环只�梢桓鐾暾���鎏逅�柚�魇�各样的不同的细胞。�细胞定向诱导分化是目前国际上研究的热点,其中�细胞向生殖细胞的分化是一个非常新的领域。近年来,在移植研究中用原始生殖细胞���蜕�掣上赴���来改善生育已经取得了不同程度的成功,这目前为止,共有五个实验室分化成功。这五个实验室都是先将胚胎于细胞分化成类胚体��,����缙谂咛サ湫偷淖橹�低常�偌右恍┯盏技粱蛱跫�嘌�基或者只是让细胞自发分化,一段时间之后可以检测到生殖细胞标志分子的表达。本研究是将小鼠睾丸支持细胞与�细胞共培养,支持细胞与�细胞形成细胞间接触,同时支持细胞还可以分泌一些细胞因子如骨形态发生蛋白��一�,在这两种因素的作用下,诱导�细胞向生殖细胞分化,目的在于用模拟体内的微环境来诱导�细胞分化成生殖细胞。我们将小鼠睾丸支持细胞与�细胞共培养,在一定的时间点用���,原位杂交,免疫组化和��������检测生殖细胞标志分子的表达;其中鼠��同源体����表达有力证实了小鼠�细胞分化成生殖细胞。通过该研究,我们用模拟体内的微环境诱导�细胞分化成生殖细胞,建立一种相对稳定的体外分化系统,有助于分析生殖细胞分化过程中的基因演变和外遗传的程序重调,有助于核转移技术的发展和不育治疗。第一部分小鼠睾丸支持细胞的分离培养与鉴定克隆带有锌指结构域的支持细胞基因���,与���.��雍蠊菇ㄖ刈橹�第二军医大学硕士学位论文中义摘要
测到三天条件培养基诱导组和自发分化组中生殖细胞的标志物��珼������,���和��鴗的表达,七天条件培养基诱导组和自发分化组中���粒���.���。用���直鹈盖兄柿����.�猄���竦孟�性化模板进而合成探针。原位杂交检测����在培养的细胞中的表达;用�鯬�的方法检测雄激素结合蛋白���谥С窒赴�械谋泶铩A硗猓�С�细胞在电镜下有特征性结构,对细胞进行电镜拍照观察。结果:光镜下,支持细胞多为多边形,细胞完全铺开,成膜状,相邻细胞