定量PCR介绍.ppt

27 September 2018
实时荧光定量PCR介绍
宝生物工程(大连)有限公司
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主要内容
Real Time PCR基础知识
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Real Time PCR实验方法
3
Real Time PCR解析方法
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Real Time PCR应用实例
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27 September 2018
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Real Time PCR基础知识
1. Real Time PCR的用途及原理
2. Real Time PCR的检测方法
Real Time PCR基础知识
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27 September 2018
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Real Time PCR的用途
Real Time PCR用途
定性分析
定量分析
病毒及病原菌定量分析
导入基因拷贝数解析
GMO定量检测
差异显示结果验证
基因芯片结果验证
siRNA效果确认
mRNA表达量分析
病毒及病原菌检测
物种鉴定
基因分型
绝对定量
相对定量
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27 September 2018
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Real Time PCR的原理
激发光
发射光
使用Real Time PCR扩增装置实时监测PCR扩增产物并进行分析的方法。
Real Time PCR
Ct值
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27 September 2018
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Real Time PCR的原理
同一个样品重复96次PCR的扩增曲线
Ct值
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27 September 2018
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Real Time PCR扩增过程中,每个反应管内的荧光信号值
达到设定的阈值时所经历的循环数。
( C-代表Cycle,t-代表threshold)
Ct值概念
阈值:在扩增曲线的指数增长区域内适当位置上设定的
荧光检出界限。
Real Time PCR中的概念
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27 September 2018
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在PCR反应体系中加入荧光物质,并实时监测荧光信号积累的整个PCR进程,
最后通过已知浓度的标准品制作的标准曲线对未知浓度的样品进行定量分析。
Real Time PCR的原理
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27 September 2018
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生产厂商
仪器名称
TaKaRa公司
Thermal Cycler Dice TP800
Applied Biosystems公司
ABI PRISM 7700、7000、7300、7900HT、 7500Fast
Roche公司
LightCycler® 、LightCycler® 480
Cepheid公司
Smart Cycler、Smart Cycler II、Smart Cycler ® TD
Bio-Rad公司
iCycler iQ、iQ5 Real-Time PCR Detection System
Corbett Research公司
Rotor-gene2000、Rotor-gene3000 、 Rotor-gene6000
MJ Research公司
Opticon、MJ Mini Cycler、 MiniOpticon
Stratagene公司
Mx4000®、Mx3000P® 、Mx3005PTM
杭州博日
LINE-GENE FQD-33A、LINE-GENE FQD-66A
Real Time PCR检测系统--简介
实时荧光定量PCR介绍
27 September 2018
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LightCycler® 480
Rotor-gene6000
MiniOpt