石蜡组织切片技术简介.ppt

石蜡组织切片技术简介
动物科技学院贾斌
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石蜡切片制作过程
切片前的设备试剂准备
取材
固定
修块
冲洗
修切
脱水
透明
包埋
修蜡
切片
粘片
烤片
脱蜡
入水
染色
脱水
透明
封片
烘干后粘贴标签。
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石蜡切片制作过程
一、切片前的设备、试剂准备
1、设备:
显微镜
切片机
磨刀机
脱水机
恒温箱
离心机
天平
酸度计
定时器
手术器械
染色架
盖玻片
载玻片
浸蜡和包埋用具
水浴锅
染色缸
冰箱
石蜡
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石蜡切片制作过程
一、切片前的设备、试剂准备
1、试剂:
蛋白甘油
盐酸-酒精
石炭酸-二甲苯
碳酸锂饱和水溶液
碘酒
Lugol碘液
苯***水
Ringer液
Locke液
升***饱和水溶液
酒精稀释液
酸缸洗液
各种固定液(17种)
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石蜡切片制作过程
一、取材
1、动物的致死:
A:麻醉法(***麻醉不利于丘脑下部神经分泌物染色)
B:空气栓塞法(不适宜于血管注射标本)
C:击头法(不适宜于脑部标本制作)
D:断头法
E:股动脉放血法(不适宜于肠系膜铺片的制作)
取材要快!
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石蜡切片制作过程
一、取材
2、取材注意事项:
A:材料新鲜。
B:组织块力求小而薄(×1×2~×2×5厘米)
C:勿使组织块受挤压、重复切割。
D:保持组织原有形态(变形,皮肤的固定)
E:熟悉要取材的部位。
F:注意品种的选择。(肥大细胞-小鼠;胰岛-豚鼠)
G:选择好组织的切面。
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石蜡切片制作过程
二、固定
〈一〉、固定方法:
1:蒸汽固定法。(适宜于小而薄的组织)
2:注射、灌注固定法。(局部、全身,在全身浸泡)
3:小块组织固定法。(最常用的方法)
〈二〉、固定目的:
1: 防止自溶 2: 防止膨胀和收缩 3:使组织块硬化便于制片
4:保持原有状态 5:防止组织块在制片过程中损坏。
6:使不同组织产生不同的折光率,对染料不同的亲和力。
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石蜡切片制作过程
二、固定
〈一〉、注意事项:
1:组织块不宜过大。
2:固定液量大于组织块体积20倍。(底部衬脱脂棉)
3:选择渗透力强、组织不易收缩或膨胀的固定液。
4:固定时间要根据组织块的大小、气温、固定液的不同而定。
5:一般要在固定后2~3小时再修整、再固定。
6:取材之前要考虑好一些特殊的组织所需的特殊固定液。
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石蜡切片制作过程
二、固定
不同固定液渗透速度(肝脏、室温,引自Culling,1974)
固定剂种类
浸入深度(毫米)
4 小时
8 小时
12 小时
10%乙酸



5%三***乙酸



10%甲醛



95%乙醇



%升***



苦味酸(饱和溶液)



%***钾



%铬酸



4%锇酸



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石蜡切片制作过程
二、固定
〈一〉、固定液
1、单纯固定液:
:酒精:
是一种还原剂,不能与铬酸、***钾、锇酸混合。多用于复合固定液使用。80~95%的固定效果好。渗透力弱。经其固定的细胞核着色不良,不宜与染色体的固定。高尔基体、线粒体的固定避免使用酒精。其缩水性强(20%),组织变硬。多用于糖原的固定。
固定液分为单纯固定液和复合固定液。一个好的固定也应该具有渗透力强,组织不变形,染料具有较好的亲和性,组织有一定的硬度和折