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实验Folin酚试剂法测蛋白质含量ppt课件.ppt

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Lowry’s法(Folin-酚试剂法)测定蛋白质含量
Determination of protein content by Lowry‘s method
怎样测定血清中蛋白质的含量
蛋白质含量测定的常用方法比较
选择测定方法时应考虑
1、实验对测定所要求的灵敏度和精确度;
2、蛋白质的性质;
3、溶液中存在的干扰物质;
4、测定所花费的时间等。
原理
第一步:双缩脲反应
在碱性溶液中,双缩脲(H2NOC-NH-CONH2)能与Cu2+作用,形成紫色或紫红色的络合物,这个反应叫做双缩脲反应。由于蛋白质分子中含有与双缩脲结构相似的多个肽键, 因此有双缩脲反应。
即在碱性溶液中,蛋白质分子中的肽键与碱性铜试剂中的Cu2+作用生成紫红色的蛋白质- Cu2+复合物。
原理
第二步:Folin-酚显色反应
Folin-酚试剂在碱性条件下极不稳定,其磷钼酸盐-磷钨酸盐易被酚类化合物还原而呈蓝色反应(钼蓝和钨蓝的混合物)。由于蛋白质中含有带酚羟基的酪氨酸( Tyr ) ,故有此显色反应。
即蛋白质- Cu2+复合物中所含的酪氨酸或色氨酸残基还原酚试剂中的磷钼酸和磷钨酸,生成蓝色的化合物。
在一定浓度范围内,蓝色的深浅度与蛋白质浓度呈线性关系,故与同样处理的蛋白质标准液比色即可求出蛋白质的含量。
即根据预先绘制的标准曲线求出未知样品中蛋白质的含量。
原理

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