胶体金试纸条的制备.ppt

免疫胶体金技术简介
Immune colloidal gold technique
2015-1-27
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目录
1
胶体金技术的种类
2
胶体金的合成
3
胶体金的标记与纯化
4
胶体金免疫层析法试剂的组成
5
胶体金免疫层析试纸的应用
7
胶体金技术的发展
胶体金免疫层析试纸的检测模式
6
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胶体金免疫层析(Gold Immune – Chromatographic Assay, GICA)技术是结合了胶体金技术和免疫层析技术发展而来的,其本质为一种固相反应的 ELISA,并用胶体金来代替底物显色。
免疫胶体金技术
是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术。
胶体金标记
实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。
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胶体金技术的发展
1939-----雏形
Kausche等把烟草花叶病毒吸附到金颗粒上在电子显微镜下观察金离子呈高电子密度。
1971------作为标记物应用于免疫组织化学研究
Faulk等首先将兔抗沙门菌抗血清与胶体金颗粒结合,用直接免疫细胞化学技术检测沙门菌的表面抗原。
1974------实现间接免疫金染色法
Romano将胶体金标记到马抗人的IgG上,实现了间接免疫金染色法
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胶体金技术的种类及优点
快速免疫金渗滤法(immuogold filtration assay ,IGFA)
即穿流式(flow through)的固相膜免疫测定。
主要由两部分组成:膜渗滤装置和标记结合物。前者为一塑料小盒,其中填满吸水性物质,面上紧贴放置一片吸附有抗体(以双抗体夹心法测抗原为例)的***纤维膜,标记结合物为免疫金。
A:金标记抗体
B:标本中的抗原
C:包被抗体
D:NC膜
E:吸水材料
F:塑料盒
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免疫层析法( immunochromatogra-phy,ICA)
是继IGFA之后发展起来的另一种固相膜免疫测定,与IGFA利用微局限性膜的过滤性能不同,免疫层析法中滴加在膜一端的样品溶液受膜的毛细管作用(基于层析作用的横流(lateral flow) )向另一端移动。移动过程中被分析物与固定在膜上某一区域的受体(抗原或者抗体)结合而被固相化,无关物质则越过该区域而被分离,然后通过标记物显色来判定试验结果,以胶体金为标记物的实验称为胶体金免疫层析试验。
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免疫胶体金技术的特点
优点:
检测方法简单而快速,数分钟即可得出结果;
不需仪器设备,操作人员不需特殊训练;
试剂稳定,适用于单份测定;
无污染;
GICA的特点是单一试剂,一步操作。小型实验室即有条件开发生产。
干燥包装的试剂可在室温保存一年以上。
成为目前“病人身边检验”(point-of-care testing,POCT)中广为应用的方法。
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最近由于原料的精选和制作工艺的改进,已能制备出可用于定量测定的GICA试剂。Roche公司生产的用于急性心肌梗死诊断的肌钙蛋白和肌红蛋白的GICA试剂和匹配的简便测读器Cardiac Reader,其精密度和准确性均符合定量测定要求。
不足:
金免疫测定中应用的是单份试剂,难于进行质量控制。即使是同一批生产的试剂,也很难保证每个试剂的同一性。因此金免疫测定一般只能用于定性试验。
其定量检测和灵敏度的提高还有赖于新原料和新材料的开发与应用。
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胶体金的合成
①白磷还原法(1905年)可合成3nm左右大小的金颗粒;
②白磷还原法(1925年)经改良后,可合成5~12nm大小的金颗粒;
③抗坏血酸还原法(1958年)可合成6~13nm大小的金颗粒;
④柠檬酸三钠还原法(1973年)可合成5nm、15nm、30nm、60nm大小的金颗粒;
⑤乙醇—超声波还原法(1980年)可合成6~10nm大小的金颗