沙门氏菌志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌的检验.docx

【GB/—1994】沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌的检验1 主题内容与适用范围本标准规定了应用肠杆菌科噬菌体诊断法检验食品中沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌的基本要求、操作程序和结果判定。本标准适用于各种食品、食物中毒的检验,也适用于食品从业人员的肠道沙门氏菌和志贺氏菌带菌检验。 2 引用标准 GB  食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验 GB  食品卫生微生物学检验志贺氏菌检验 GB  食品卫生微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验 GB  食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂 3 设备和材料 温箱:36±1℃。 水平仪。 灭菌平皿:90mm×15mm。 定量滴管:每滴约10μL。,灭菌。 橡皮乳头。 灭菌棉签。 酒精灯。 接种棒,镍铬丝。 试管架。 4 培养基和试剂 营养琼脂、营养肉汤按GB 。 蛋白胨水、靛基质试剂按GB 。 三糖铁琼脂按GB 。 肠杆菌科诊断用噬菌体,7种和3种。安瓿启开后用无菌毛细吸管吸出移入灭菌小试管内,用无菌胶塞塞紧,放于4℃冰箱备用。 5 检验程序 肠杆菌科诊断用噬菌体检验沙门氏菌的程序见图1: (表略) 肠杆菌科诊断用噬菌体检验志贺氏菌的程序见图2: (表略) 肠杆菌科诊断用噬菌体检验致泻大肠埃希氏菌的程序见图3: (表略) 6 检验步骤 前增菌、增菌和分离 沙门氏菌的前增菌、增菌和分离,按GB 。 志贺氏菌的增菌和分离,按GB 。 致泻大肠埃希氏菌的增菌和分离,按GB 。 噬菌体试验 培养基的准备营养琼脂平板(含琼脂1%~%,琼脂量视其凝固性而定,约为一般用量的3/4),每个9cm平皿中约25mL,放在水平台面上俟其凝固,翻转平板,在36℃半开皿倒置约1h,以烘干培养基表面水分,并使琼脂具有显著的吸水性。 试验菌液的准备从选择性鉴别平板上挑取菌落,一般应多挑几个菌落,以防遗漏。检验沙门氏菌时,不但应挑取乳糖阴性产H2S和不产H2S的菌落,还应挑取乳糖阳性产H2S的菌落。检验大肠埃希氏菌时应挑取乳糖阳性或阴性的菌落3~5个。检验志贺氏菌时应挑取可疑菌落接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体管,于36℃培养过夜,次日选取三糖铁底层产酸、斜面产碱,不产H2S,不产气无动力的培养物。下述两种方法可供选用。 一法:将待试菌落接种于营养肉汤管内,于36℃培养过夜。挑取此肉汤培养物一满环,稀释于一管盛有1~2mL的蛋白胨水试管内,使成为1∶200~1∶400稀释菌液,含菌量约为1×106/mL。 二法:用接种针在鉴别平板上轻轻蘸取可疑菌落,挑取菌量不宜过多,稀释于一管盛有1~2mL蛋白胨水试管内,使其含菌量约与一法相似。 涂抹试验菌液 斑点涂抹法:将营养琼脂平板表面自圆心起分为三等份,每等份可供涂抹一株细菌培养物。每挑取试验菌液