实验考马斯亮蓝法测定蛋白质含量.docx

实验五考马斯亮蓝法测定蛋白质含量一、实验目的掌握考马斯亮蓝染色法定量测定蛋白质含量的原理与方法熟练分光光度计的使用和操作方法。实验原理考马斯亮蓝G250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种,它与蛋白质的疏水微区相结合,这种结合具有高敏感性。它在酸性溶液中呈棕红色,最大光吸收峰在465nm,当它与蛋白质结合形成复合物时,其最大吸收峰改变为595nm。考马斯亮蓝G-250—蛋白质复合物呈蓝色,在一定范围内,595nm下光密度与蛋白质含量呈线性关系,故可以用于蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝结合法是近年来发展起来的蛋白质定量测定法,本方法具有操作方便、快速、干扰因素少的特点。离心机的使用说明:,重量不等时将水加在管套里。,要求必须对称。,再定时间,定好时间后缓慢旋转转速旋钮,使离心机均匀的提速到预定转速。分光光度计的使用说明:,预热20min后,再选择须用的单色光波长。,盖上样品室盖,推动试样架拉手,使对照比色皿(溶液装入4/5高度,置第一格)置于光路上,调节100%透射比按钮,使吸光度值A=。,使样品比色皿置于光路上,读出吸光度值。,取出比色皿,洗净后置于乙醇溶液中浸泡脱色。“关”,拔下电源插头。试剂与器材:试剂:(1)%NaCl:9gNaCl溶解在1L的容量瓶中。标准蛋白质:称取50mg结晶牛血清蛋白定溶于50ml容量瓶里。染液:考马斯亮蓝G-,溶于250mL95%乙醇,再加入500mL85%(W/V)磷酸,保存于棕色瓶中,称为母液。取150mL然后加蒸馏水定容到1000mL,保存于棕色瓶中,备用。器材:试管;吸管10mL、l5mL、lmL、;722分光光度