基因工程的复习地的题目2.doc

实用标准文案:..基因工程复****资料限制性核酸内切酶:是由细菌产生的一类能特异识别双链DNA中的特定碱基序列,并在识别位点切割磷酸二酯键的核酸内切酶(简称限制酶)。  基因文库:将所有的重组DNA分子都导入宿主细胞进行扩增,得到分子克隆的混合体,这样一个混合体称为基因文库。  cDNA文库:从组织细胞中分离得到纯化的mRNA,然后以mRNA为模板,利用逆转录酶合成其互补DNA,再复制成双链cDN***段,与适当载体连接后导入受体菌内,扩增,构建cDNA文库。操纵子:原核生物的几个功能相关的结构基因往往排列在一起,转录生成一个mRNA,然后分别翻译成几种不同的蛋白质。这些蛋白可能是催化某一代谢过程的酶,或共同完成某种功能。这些结构基因与其上游的启动子,操纵基因共同构成转录单位,称操纵子。启动子:是RNA聚合酶结合位点周围的一组转录控制组件,包括至少一个转录起始点。在真核基因中增强子和启动子常交错覆盖或连续。有时,将结构密切联系而无法区分的启动子、增强子样结构统称启动子。基因工程:在体外将外源基因进行切割并与一定的载体连接,构成重组DNA分子并导入相应受体细胞,使外源基因在受体细胞中进行复制、表达,使目的基因大量扩增或得到相应基因的表达产物或进行定向改造生物性状。 简单概括,就是将外源目的基因与载体重组后再进入宿主细胞的过程。Klenow片段:是大肠杆菌DNA聚合酶I的羧基端片段,长度为全酶的70%。具有5’→3’聚合酶活性及3’→5’外切酶活性。同裂酶:即从不同的原核生物中分离出来,具有相同识别序列的限制性核酸内切酶。切割的位点可以相同,也可以不相同。同尾酶:来源不同,识别序列也不同,但切割DNA分子所得到的DN***段具有相同的黏性末端,这样一组限制性核酸内切酶称为同尾酶。克隆载体:是一种能携带外源DN***段进入受体细胞,并得以维持或表达的DNA分子。表达载体:是在克隆型载体的基础上增加了表达元件,并且在受体细胞中能稳定维持和表达外源目的基因穿梭载体:是能够在两类不同宿主中复制、增殖和选择的载体。如有些载体既能在原核细胞中复制又能在真核细胞中复制。这类载体主要是质粒载体。聚核酶链式反应(PCR):PCR的基本工作原理是以拟扩增的DNA分子为模板,以一对分别与模板5'末端和3'末端相互补的寡核酸苷片段为引物,在DNA聚合酶的作用下,按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA合成,重复这一过程,即可使目的DN***段得到扩增。 多克隆位点:DNA载体序列上人工合成的一段序列,含有多个限制内切酶识别位点。能为外源DNA提供多种可插入的位置或插入方案。包涵体:在某些生长条件下,大肠杆菌能积累某种特殊的生物大分子 ,它们致密地集聚在细胞内,或被膜包裹或形成无膜裸露结构,这种水不溶性的结构称为包涵体 。黏性末端:是指DNA分子在限制酶的作用之下形成的具有互补碱基的单链延伸末端结构,它们能够通过互补碱基间的配对而重新环化起来。 问答题1、常用的工具酶有哪些?其主要用途是什么?  答:限制性内切核酸酶,DNA聚合酶和Klenow大片段,DNA连接酶,碱性磷酸酶,末端脱氧核苷酸转移酶. 限制性内切核酸酶, 能够识别特异的DNA碱基序列, DNA碱基序列往往呈回文对称结构;