氟苯尼考残留检测ELISA试剂盒说明书.doc

***苯尼考(Florfenicol)ELISA检测试剂盒说明书原理本试剂盒采用间接竞争ELISA方法,在微孔条上预包被偶联抗原,样本中的残留物***苯尼考和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗***苯尼考抗体,加入酶标记物后,用TMB底物显色,样本吸光值与其所含残留物***苯尼考的含量成负相关,与标准曲线比较可得出相应残留物***苯尼考的含量。试剂盒技术指标交叉反应率***苯尼考…………………100%***苯尼考***…………………%甲砜霉素…………………<1%***霉素…………………<%试剂盒组成微量测试孔:每条8孔,一板12条标准液X6瓶:(1ml/瓶)0ppb、、、、、…………………12ml抗体浓缩液…………………7ml底物A液…………………7ml底物B液…………………7ml终止液…………………7ml20X浓缩洗涤液…………………40ml2X浓缩复溶液…………………50ml所用仪器、试剂具备的仪器:微孔板酶标仪、氮气吹干装置、均质器、振荡器、离心机、刻度移液管、天平()微量移液器:单道20µl-200µl、100µl-1000µl、多道250µl试剂:乙酸乙酯、正己烷。样本前处理步骤样本处理前须知处理任何样本时,都必须注意:(a)实验中必须使用一次性吸头,在吸取不同的试剂时要更换吸头。(b)实验之前须检查各种实验器具是否干净,必要时可对实验器具进行清洁,以避免污染,干扰实验结果。样本前处理需配制:配液1:将2X浓缩复溶液用去离子水按1:1稀释。(1份浓缩复溶液+1份去离子水,用于样本提取后的复溶)(a)组织(鸡肉/肝、猪肉/肝、虾、鱼等)前处理方法用均质器均质组织样本;称3±,加入6ml乙酸乙酯,振荡5min,室温4000r/min以上,离心10min;取出2ml上层液体在50-60℃下氮气/空气吹干或旋转蒸发仪蒸干加入1ml正己烷溶解干燥的残留物,再加1ml稀释后的复溶液强烈振荡30s,室温4000r/min以上离心15min。取50µl下层相用于分析。样本稀释倍数:1(b)蜂蜜取2±,放入离心管中,用4ml去离子水溶解;加入4ml乙酸乙酯上下振荡5min;室温4000r/min以上离心10min;移取1ml上层乙酸乙酯()到另一离心管中,50-60℃氮气流下干燥;,混合30s;取50 µl用于分析。样本稀释倍数:1检测下限:::使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温(20-25℃)。使用之后立即将所有试剂放回2-8℃。在ELISA分析中的再现性,很大程度上取决于洗板的一致性,正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。在所有恒温孵育过程中,避免光线照射,用盖板膜封住微孔板。操作步骤从4℃冷藏环境中取出所需试剂,置室温(20-25℃)平衡30min以上,注意每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔及框架,将不用的微孔放入自封袋,保存于2-8℃。配液:将40ml浓缩洗涤液(20倍浓缩)用去离子水按照1:19稀释(1份浓缩洗涤液+19份去离子水),或按所需用量配制洗涤液。编号:将样本和标准品对应微孔按序编号,每个样本和标准品做2孔平行