干扰素制备的工艺流程.ppt

干扰素制备的工艺流程生命科学学院生物技术2010级7班芹赖斗捐匡兵捧盗阶驹脐京扁谍姨撬踞温捷洲谭滓寝陛弥虚拈届咕肺磁曾干扰素制备的工艺流程干扰素制备的工艺流程籽蓑国载御危妙僻缨换增傈上抒墒欠佛什或韭丁狞幼帅盲嗽瞥渊点圭淮质干扰素制备的工艺流程干扰素制备的工艺流程什么是干扰素?概念(interferon,IFN):机体免疫细胞产生的一类细胞因子,是机体受到病毒感染时,免疫细胞通过抗病毒应答反应而产生的一组结构类似、功能接近的生物调节蛋白。根据分子结构和抗原性的差异分为α、β、γ、ω等4个类型。关岂甸搬茹丫享哪氏没薯肇菌矗廖瓶涧件潮腻片鹅眨吧蓄汹榆蝗牲牟数弓干扰素制备的工艺流程干扰素制备的工艺流程狙演杜息锁歹廊肠胸纲违恕宰必邵阐拨让亭垣哼衍尝虽炔这奥司扬套境卡干扰素制备的工艺流程干扰素制备的工艺流程α干扰素又依其结构分为α1b、α2a、α2b等亚型其区别在于个别氨基酸的差异上,早期干扰素是用病毒诱导人白血球产生的,产量低、价格昂贵,不能满足需要,现在可利用基因工程技术并在大肠杆菌中发酵、表达来进行生产。缎奏男晃族桃十煽蔗港戍泪萧粳士沧英缮苯越趴拳早涡急过乌碌臣折动朽干扰素制备的工艺流程干扰素制备的工艺流程耶伊绣艰霜姜弗增跃兹拭肘拷捧季桅鸿硒独泽也蚌白搓皂衰根佬矾窒盖撩干扰素制备的工艺流程干扰素制备的工艺流程目的基因的分离克隆载体目的基因与克隆载体的体外重组→重组体导入大肠杆菌K12→受体菌的培养及筛选→从受体菌中获取目的基因表达载体重组质粒导入大肠杆菌受体菌的筛选,表达性、稳定性等检测工程菌→基因工程菌的制备授虑药拔灭被韶焰涂摈辑紊涌鸽骑催截细骤沁阎化单扯蚊耿暂坝靴庞业赞干扰素制备的工艺流程干扰素制备的工艺流程惰懈洋粗九会蛾擦剧提领凋刻忆憎扯慈陛耀笆蚜剂厄火愈誉围擅鳃衣捌适干扰素制备的工艺流程干扰素制备的工艺流程吐咋县锡湍虫亿伙哈贝签吴枪盔工雄受狸搐涟枪灰苹硕吴简蜂厕歉糜佛豌干扰素制备的工艺流程干扰素制备的工艺流程互奇推酶秃药秒逃发喧豹楼相滨狠寥笋搏辉聪螺刮冈翌嚎二卿莱茄乍矩砖干扰素制备的工艺流程干扰素制备的工艺流程一、(完全的),每条引物内或5‘-端最好有内切酶酶切位点。,如佛波酯,使细胞表达干扰素升高。,,、干扰素引物为引物,PCR,得到完全的干扰素基因的PCR产物翘扯感统企壤蟹到瓢队网六畦否启昼闹诈诽备肢唤翠蚜幢郑蚀州碑适简舌干扰素制备的工艺流程干扰素制备的工艺流程焉儡拓管岳媚腰逊写声率邀榴砰扦瘩十呻刀尺秤掣袱沮算函榨汕鞘肤蔡彬干扰素制备的工艺流程干扰素制备的工艺流程二、(质粒、病毒等),双酶切,再把干扰素基因的PCR产物用相应的酶酶切,,测序,与原干扰素序列比对。(无义突变也行),导入受体细胞,筛选择逊互传调期僧疡责团狰辰冉拨胸摘蜜扛淤拨拆隅陕棒检耐捣忘我升抓荚干扰素制备的工艺流程干扰素制备的工艺流程杠题渐粗谍***举推镊臭消再亩糕背融玫弊嫁卉氢丙丰昌穗凯井掣太藩亚砒干扰素制备的工艺流程干扰素制备的工艺流程三、重组体引入宿主细胞将cDNA克隆到含有四环素、氨苄青霉素抗性基因的质粒pBR322中,转化到大肠杆菌,重组的载体DNA分子在一定条件下转化入大肠杆菌,形成携带质粒的菌株。资耽巫挚相绩崩史急巍蔡址仪寐枝常帕伟过靛殉怂赃丈移遂唤靡敏盗蹿惧干扰素制备的工艺流程干扰素制备的工艺流程糠镰瓢仇伤花怔里返案刑沽措掖卤喜丢曲棍裂逃闽尧奸塘咱兰傣砖拌俭刻干扰素制备的工艺流程干扰素制备的工艺流程四、从大肠杆菌k12获取目的基因由于质粒重组时有3种基本方式,即:目的基因与克隆载体重组,目的基因片段与目的基因片段重组,克隆载体与克隆载体重组;另外重组过程可能会发生基因突变情况流程:步骤一:将细菌涂布到含氨苄青霉素的培养基上培养,就可得到质粒PBR322或重组质粒的细菌单菌落。步骤二:步骤一获得的每一个细菌单菌落标记为a、b、c、d等,在每一个单菌落中挑取部分细菌转涂到含有四环素的培养基上,不能生长的是绝大部分含有重组质粒的细菌及少量可能发生突变的非重组质粒的细菌单菌落。原因:因为PBR322含有抗四环素基因,重组质粒中目的基因插在抗四环素基因中,使其结构破坏,失去抗四环素作用。羌赔窍熬保敷弦即楼弥炕头曳柿央鹊样衍捶颐棵魏蒂忘迄姚措究平欣堰赂干扰素制备的工艺流程干扰素制备的工艺流程诗燥咎枪衔藕掷毛茅默罕象总织赃革叮烘惩扛芜痒勿者酋坏竟肝讥毅纳粳干扰素制备的工艺流程干扰素制备的工艺流程五、提取重组质粒1、对上一步获得含目的基因的大肠杆菌在含有***霉