医学博士学位论文-L型钙通道CACNA1D调控前列腺癌细胞雄激素受体活性的机制研究.doc

分类号学号 D201078310_ _
学校代码 10487 密级_
博士学位论文
A1D调控前列腺癌
细胞雄激素受体活性的机制研究
学位申请人:曾星
学科专业:外科学(泌尿外科)
指导教师:叶章群教授
胡志全教授
李本义教授
答辩日期:2013年5月
DOCTORAL DISSERTATION
L-type Calcium channel A1D modulates
activities of androgen receptor in prostate cancer cells
Doctoral Candidate : Zeng Xing
Major : Urology
Doctoral Supervisor : Prof. Ye Zhangqun*
Co-Supervisor : Prof. Hu Zhiquan*
Prof. Li Benyi**
Department of Urology
Tongji Hospital, Tongji Medical College
Huazhong University of Science & Technology*
University of Kansas Medical Center**
Wuhan·China
May,2013
目录
前言 1
参考文献 3
中文摘要 5
Abstract 7
第一部分 A1D的筛选鉴定和临床意义分析 9
实验一 M的数据分析筛选与前列腺癌相关的L型钙通道α1亚单位基因 9
1. 材料与方法 9
2. 结果 9
3. 讨论 13
15
实验二 A1D基因在前列腺癌中的表达与疾病进展的关系 16
1. 材料与方法 16
2. 结果 18
3. 讨论 23
24
第二部分 A1D调控前列腺癌细胞雄激素受体活性 25
实验一 L型钙离子拮抗抑制前列腺癌细胞生长的实验研究 25
1. 材料与方法 25
2. 结果 26
3. 讨论 27
4. 参考文献 27
实验二增强/A1D的表达调控雄激素受体核内转录活性的实验研究 29
1. 材料与方法 29
2. 结果 32
3. 讨论 34
4. 参考文献 36
实验三钙通道阻滞剂抑制雄激素受体和雄激素受体调节基因PSA和NKX 38
1. 材料与方法 38
2. 结果 39
3. 讨论 40
4. 参考文献 41
英文论文 43
全文结论 60
综述雄激素受体及其调节基因在前列腺癌中的相互作用 61
参考文献 75
攻读学位期间发表论文目录 81
致谢 82
前言
钙(Ca2+)信号通路可介导多种生理学功能,Ca2+通过电压调控的钙通道(Voltage- Gated Calcium Channel, )和细胞内钙池摄取导致细胞内流与外流,维持细胞膜两侧的生物电位,进而影响细胞生长和传导功能[1-4]。已证实通过抑制Ca2+内流可抑制细胞的增殖和侵袭[5-8]。早期研究[9-13] 显示细胞内Ca2+浓度的升高与前列腺癌LNCaP细胞雄激素受体(androgen receptor, AR),L型钙通道阻滞剂维拉帕米可抑制雄激素诱导下细胞内Ca2+浓度的升高,抑制Ca2+内流可导致前列腺上皮细胞去势样细胞凋亡。这些研究结果提示Ca2+内流与前列腺癌细胞生长、侵袭和凋亡相关。
上世纪90年代以来,L型钙通道阻滞剂被广泛应用于治疗高血压病,大量流行病学调查[14-18]分析了这类药物的使用与前列腺癌发病风险的相关性,其中有研究[17, 18]发现,高血压病患者长期服用L型钙通道阻滞剂后前列腺癌的患病率明显降低,提示L型钙通道阻滞剂有可能与前列腺癌的疾病发展过程相关。
L钙离子通道由多种功能蛋白组成,其中α1蛋白家族是通道的主要功能单位,包括α1C, α1D, α1F, α1S,四种蛋白亚型[1, 2]。这些钙通道蛋白的表达多见于细胞膜动作电位产生时,有报道显示α1D可见于AR+的前列腺癌VCaP和LAPC-4细胞[19]。
为进一步了解L型钙通道阻滞剂在前列腺癌疾病进展中所起的作用,M cDNA 微阵列数据分析、前列腺细胞系、前列腺组织微阵列芯片, A1D基因特异性在前列腺癌组织和细胞中高表达且与肿瘤临床分期、病理分级和去势难治进展相关,A1D与前列腺癌的疾病进程可能相关。
雄激素与AR受体结合在前列腺癌的发病与疾病进展过程中具有举足轻重的地位,通过手术和内分泌治疗可去除绝大部分雄激素,但前列腺癌仍不可避免的进展为去势难治性[21]。研究[22]发现,在去势前列腺癌中A