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硫化氢对大鼠肠缺血再灌注后回肠收缩活性和肠神经的保护作用

摘要

研究目的
肠缺血再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)损伤可在出血性休克、小肠移植、机
械性梗阻和严重外伤等过程中发生,可引起小肠收缩活力降低、微血管通透性升高和
肠黏膜屏障功能下降,并可引起肠道细菌移位进而导致多脏器功能衰竭综合征。肠缺
血再灌注可通过引起肠神经元、平滑肌细胞、Cajal 间质细胞(interstitial cells of Cajal,
ICC)的凋亡而引起小肠运动功能障碍,尤其是肠神经系统(enteric nervous system,
ENS)中胆碱能肠神经受损从而引起兴奋性神经递质乙酰胆碱(acetylcholine,ACh)
减少是最重要的原因之一。尽管肠缺血再灌注在临床中较为常见且可引起严重的并发
症和死亡率,但是仍缺乏有效的治疗药物。硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)是一种
内源性气体信号分子,在哺乳动物体内发挥着许多重要的生理功能。近来,许多学者
证实其可在多种脏器如心、肺、肝、肾、肠缺血再灌注模型中起到保护作用。但这些
实验多数都是在缺血前预防性的给予硫化氢,尚未有实验证实硫化氢能否在缺血之后
起到保护肠神经及肠运动功能的作用。本课题旨在研究在缺血之后再灌注之前给予硫
化氢是否有保护肠收缩活性和肠神经元的作用及相关机制。

研究方法
24 只雄性 SD 大鼠随机分为 4 组(每组 6 只):正常组(A),假手术组(B),肠
缺血再灌注组(C),肠缺血再灌注加硫化氢干预组(D)。 C 组和 D 组大鼠通过夹闭
肠系膜上动脉 1h 后松开血管夹再灌注 4h 来建立肠缺血再灌注模型;硫化氢的供体
NaHS(10μmol/kg)于再灌注前 20min 腹腔内注射;B 组大鼠仅行开腹后翻动肠道而
未夹闭动脉。功能学实验通过离体器官恒温浴慒灌流技术记录离体回肠肌条自发收缩
和对氯化钾(KCl;30mmol/L)、乙酰胆碱(ACh;10-5mol/L)、电场刺激(electrical field
stimulation,EFS;30V,10Hz,,10s)的反应。形态学实验通过免疫荧光检
测肠肌间神经丛( myenteric plexus , MP )中 Hu 蛋白、胆碱乙酰转移酶
(cholineacetyltransferase,ChAT)受体阳性神经元表达的变化。

结果
1、与正常组相比,假手术组离体肌条自发收缩频率、曲线下面积、对 KCl、ACh
和 EFS 的反应、Hu 蛋白和 ChAT 受体阳性神经元表达均无明显改变。
2、与假手术组相比,缺血再灌注组大鼠离体肌条自发收缩频率、对 KCl 和 ACh
的反应无明显改变;离体肌条自发收缩曲线下面积降低(p<),对 EFS 的反应明
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第二军医大学硕士学位论文
显下降(p<);在免疫荧光中,Hu 蛋白、ChAT 受体阳性神经元表达均明显降低
(p<)。
3、与缺血再灌注组相比,硫化氢干预组大鼠离体肌条自发收缩频率、对 KCl 和
ACh 的反应无明显改变;离体肌条自发收缩曲线下面积升高(p<),对 EFS 的反