缺氧诱导因子1-α在大鼠原代心肌细胞缺氧-复氧中的表达及凋亡作用研究.pdf

指导教师签名:童坐论文作者签名:墨遨童日期:兰』盗互目土魄南期:望萘康├嫉中国医科大学研究生学位论文独创性声明中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料,与我一同工作的同志对本研申请学位论文与资料若有不实之处,本人承担一切相关责任。本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定,即:研究生在校后,发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学,且导师为通讯作者,通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容C苣谌莩,以采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名:日
录目一、摘要中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯二、英文缩略语⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯前‘言⋯⋯⋯材料方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯四、本研究创新性的自我评价⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯五、参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯在学期间科研成绩⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯个人简介⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯三、论文讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯六、附录综玉苤⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯日唷
非常复杂的,缺氧诱导转录因子在缺氧过程中可以调控一系列基因的表达,缺氧诱导因子卜诖笫笤募∠赴毖跻桓囱踔的表达及其凋亡作用的研究目的方法·中文论著摘要·缺氧/复氧损伤在心肌细胞中是一个极为复杂的过程,现已证明缺氧后复氧可以导致细胞的死亡,细胞死亡既可以由坏死引起又可以是凋亡导致的。坏死是一个破坏性的不可控制的过程,而凋亡是一个高度调控的细胞自杀过程。在心肌细胞缺氧/复氧损伤中,凋亡是引起细胞死亡的一个非常重要的机制,这个机制也是高达郑庑┗,其可以通过调节血红素加氧酶.⒁谎趸:厦浮⒒费趸福和血管内皮生长因子等进而促进细胞在缺血再灌注中的生存。同时,部梢约せ促死亡调节基因,如蛋白家族的促凋亡蛋紅与死亡配体。且恢种饕4嬖谟谙吡L宓闹缓蠦区域的蛋白,过量表达的梢激活疊,进而引起线粒体通透性转换孔的开放,最后导致细胞死亡。在缺血再灌注时线粒体的功能失调起着至关重要的作用。然而,诓煌型细胞及不同环境中的调节凋亡的作用仍然存在着争议。本实验主要研究在大鼠原代心肌细胞缺氧/复氧过程中淖饔貌⒔步探讨其主要机制。我们将大鼠原代心肌细胞分别给予正常氧、缺氧∈薄⑷氧∈备囱小时、缺氧∈备囱小时及缺氧∈备囱∈崩垂鄄谋泶锴榭黾暗蛲龀潭取2捎眯干扰技术来抑制谋泶锊⒐察缘蛲龅挠跋臁
三、皿Ⅲ.榈膕㈣转染一、大鼠原代心肌细胞的培养二、原代心肌细胞缺氧/复氧损伤銼槭螅菩鄄幌蓿槭笥サ木凭ń邢荆〕鲂脑啵入不含有钙镁离子的校玫喂艹逑葱脑啵胄姆考捌渲鞫觯液,用剪刀将心脏剪成的组织块,放入约毫升的%的型胶原酶,共消化危看种印1幌吕吹男募∠赴湃肜胄幕校胄并将获得的细胞种植在呐嘌恐校湃,的培养箱中培养分钟。采取差速贴壁法纯化心肌细胞,将未贴壁生长的心肌细胞收集并种植在在培养的前时在培养基中加入疞来抑制非心肌细胞的增殖。采用这种方法培养的原代心肌细胞可以用抗∏虻鞍字亓吹タ寺】固逋ü庖哂光的方法来检测,心肌细胞纯度可达.%。心肌细胞培养时后换用含有%的胎牛血清、不含的培养基培养,所有的实验及检测都在细胞培养为了模仿缺氧环境,心肌细胞在正常培养时后将培养基换成配好的’芤/篘缓蠼赴R浦%毖跖养箱中培养薄=毖跖嘌时的细胞的培养基再次换成含有%的胎牛血清的的培养基,放到℃,的培养箱中分别培养与时。对照空白组的细胞始终培养在%,的培养箱中培养。最后将细胞分别收集进行下一步实验。心肌细胞被种植在六孔板中,培养旌笙赴诤下蚀锏皆ァ7直鸾干扰的疞朊挥懈扇抛饔米魑R跣远哉盏膕/转染到心肌细胞中,使用转染试剂严格按照生产商提供的步骤进行转染。细胞分