浅谈苏木精.docx

Forpersonaluseonlyinstudyandresearch;mercialuse蒃浅谈苏木精虿罿更新时间:2007-04-0411:18:28 作者:中山大学医学院病理学教研室凌启波膃苏木精染液为碱性染料,主要使细胞核内的染色质和胞质内的核糖体着蓝紫色,伊红为酸性染料,主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色或粉红色。薂伊红(EosinY)是一种化学合成的酸性染料,在水中离解成带负电荷的阴离子,与蛋白质的氨基正电荷的阳离子结合使胞浆染色,细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织等嗜酸颗粒被染成不同程度的红色或粉红色,与蓝色的细胞核形成鲜明对比。伊红是细胞浆的良好染料。一般与苏木素或者美兰等其他染料配套使用。肈性状:红色粉末,易溶于水,溶液呈绿色荧光,能溶于醇。虿用途:组织学用于上皮细胞、肌肉纤维和细胞浆染色。芄石蜡切片苏木精伊红(HE)染色技术是病理解剖学、组织胚胎学、法医学和生物学等领域最基本的技术操作。掌握好HE染色,也为其他染色如特殊染色、酶组化染色和免疫组化染色等技术打好基础。对于苏木精,应该有一个全面的了解,才能对常规的HE染色灵活掌握,运用自如,染出一批批理想的HE玻片标本。羄一、苏木精的性质螂苏木精,又称苏木素,苏木色精(Hematoxylin),C16H4O6,。它是一种无色或淡灰黄色粉末,市售有无水和含3H2O两种;苏木精若存放过久,接触空气,颜色可慢慢加深,用其配制苏木精染液就不理想;它易溶于乙醇、乙二醇和甘油,微溶于水;它本身不是一种染料,没有染***能,需要经过氧化和媒染后,才成为一种很好的细胞核染料。膆苏木精是一种天然植物,是以中、南美洲产的一种植物称洋苏木树(hematoxyloncampechianum)的淡红棕色的心材中提取出来的一种天然变色物质。早在300多年前,苏木精的抽提物就输入欧洲,在纺织工业上用作丝织物和羊毛的染料。后来,Waldeger(1863)开始用于组织学的染色,苏木精就成为一个十分重要的生物学染色剂。莆Boehmer(1865)从染色工业上得到启发,以明矾(硫酸铝钾)和苏木精结合作为细胞核的染色剂,称明矾苏木精(alumhematoxylin),立即得到广泛认可,并确定了铝盐作为媒染剂。随后有很多改良方法,如通过加入乙醇使苏木精易溶和防霉菌生长,加入甘油保持染液的质量稳定,使用不同的铝盐,加入各种化学氧化剂和促进酸化等。肂洋苏木树心材抽提出来的苏木精不是一种活性物质,从分子结构上,苏木精没有发色团,所以它本身不是染料,没有染色能力。但其溶液放置后,由于氧化作用使其成为一种有色的氧化苏木精,称苏木红(hematein),才成为一种染料。所谓氧化,就是使苏木精分子结构失去两个氢原子,并在其中的一个苯环转化成具有一个醌型苯环的苏木红,这个过程又称成熟(ripening)膁醌型苯环是一个发色团,这样,在苏木红的分子结构中,原有助色团羟基,又有了发色团醌型苯环,就成为一种染料。羆膃二、 苏木精的氧化膁苏木精需被氧化为苏木红,才成为一种染料。苏木精的氧化有两种方式::是指配制苏木精染液时,不加氧化剂,苏木精通过空气和阳光的作用而被自然氧化成苏木红,这过程需数周至数月。这种自然氧化所配制的苏木精染液的保存和使用寿命较长。蚆2. 人工氧化:是指在配制苏木精染液时加入一定量的氧化剂如***、碘酸钠、高锰酸钾或过氧化氢等可立即使苏木精氧化成苏木红。但要注意加入氧化剂的量不能太多,不要使苏木精分子全部氧化变成苏木红,否则,苏木精染液的使用寿命就较短。加入氧化剂过量时造成氧化过度,破坏了苏木红的分子结构,导致苏木精液的染色力减弱甚至失效。膅一种成熟的苏木精染液是苏木精、苏木红、苏木红的活性氧化产物和非活性的超氧化产物的混合物。如过度氧化,可导致大量非活性超氧化产物产生,这些产物是无色和无用的。因此,在配制苏木精染液时,精确地加入恰当的氧化剂和量是重要的。薃早期传统用氧化1g苏木精所需氧化剂的量是:肀***500mg蒇碘酸钠200mg芆高锰酸钾177mg蚁过氧化氢2ml葿在实践中,这个量配制的苏木精染液都较理想,但使用寿命不很长,染液的染色力就慢慢减弱而需重新配制。***近年有学者提出用较少量的氧化剂来配制苏木精染液,其染色效果亦佳,苏木精染液的使用寿命延长。他们推荐1g苏木精所需氧化剂的量是:肃***100mg羄碘酸钠40~100mg衿高锰酸钾90mg袈高碘酸钠35mg肅碘200mg膂高碘酸钾50mg薂理论上,1g苏木精·3H2O完全氧化成苏木红需用碘酸钠185mg,。Gill提出半氧化苏木精法,即氧化1g苏木精仅用碘酸钠100mg,这样先使部分苏木精氧化成苏木红,未被氧化的苏木精在随后的日常染色操作中慢慢氧化成苏木红。