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三、结核感染T细胞检测(T-)的主要应用 1、“菌阴”结核病患者的辅助诊断对于涂片和培养阴性的疑似结核病患者,提供一项可靠的实验室检测指标。 2、肺外结核的鉴别诊断结脑(儿童)、骨结核、肠结核(IBD患者)、结核性胸膜/腹膜炎(胸
一、背景结核病是由结核杆菌(MTB)感染引起的慢性传染病。我国是世界上22个结核病高负担国家之一,我国三分之一左右的人口已感染了结核杆菌,。2000年第四次全国结核病流行病学调查结果估计,我国现有肺结核病人约500万,主要集中在25岁及以上人群;其中痰菌阳性的结核患者约有200万人,涂阳肺结核病人150万;每年约有13万人死于结核病,。据研究,受结核菌感染的人群中,10%的人会发展为结核病。如果不采取有效的控制措施,在未来的10年,我国可能有近5000万的感染者发生结核病。解放后人们的生活水平不断提高,结核已基本控制,随着环境污染和艾滋病的传播、吸毒、免疫抑制剂的使用,酗酒与贫困,难民迁移等诸多因素的影响,结核及其它分枝杆菌所致的感染发病率又呈上升趋势。如何能够快速、准确的诊断结核病,有效的控制结核病的继续蔓延,已经成为我们迫切需要解决的问题?然而,目前结核诊断的标准仍局限于临床检查结核细菌培养和涂片直接镜检再辅以X线检查和结核菌素皮肤测试观察。这些方法均依赖于病人的临床症状,不能达到早期检测潜在结核感染的目的。结核感染T细胞试验用于结核感染的检测和结核病的辅助诊断具在独特优势: 结核感染T细胞检测(T-) 上海迪安医学检验所 Page 5 of 15 (1) 具有非常高的灵敏度和特异性(2) 不受环境分枝杆菌感染和卡介苗(BCG)接种影响(3) 基本不受机体免疫抑制剂影响,适用于HIV感染和免疫抑制剂治疗人群(4) 简单的实验室血液或胸/腹水检查(5) 24小时的快速报告结果三步简易操作: 抗凝外周血梯度离心,分离收集白细胞; 计数白细胞加入培养板,同时加入结核特异多肽抗原; 37摄氏度培养过夜,计数T细胞斑点。阳性结果表示样本含有结核特异的效应T淋巴细胞,提示患者存在结核感染。阴性结果表示可以排除结核感染的可能。二、产品的检测原理和方法结核感染T细胞检测使用英国0xford Immunotec公司生产的试剂盒,应用酶联免疫斑点技术(ELISPOT),产品的检测原理和检测方法如下。 产品的检测原理结核感染T细胞检测是利用结核杆菌感染者外周血单核细胞中存在结核特异的效应T淋巴细胞,这些淋巴细胞在受到结核杆菌特异抗原刺激后分泌INF-γ而设计的T细胞免疫斑点试验。外周血单个核细胞,结核特异的混合抗原A和混合抗原B, 结核感染T细胞检测(T-) 上海迪安医学检验所 Page 6 of 15 对照试剂一起加入预先包被抗γ干扰素抗体的微孔培养板进行培养。当外周血单核细胞中存在针对结核杆菌的效应T淋巴细胞时,培养液中加入的结核杆菌特异混合抗原多肽A和B将刺激这些效应T淋巴细胞分泌γ干扰素。分泌的γ干扰素被微孔板上的抗体捕获,再次加入的碱性磷酸酶标记并针对γ干扰素不同表位的抗体与被捕获的γ干扰素结合,滞留在微孔板表面。显色底物溶液在反应部位被酶分解形成不溶性色素沉淀斑点。每一个斑点代表一个γ干扰素分泌细胞(结核特异的效应T淋巴细胞)。通过对