防腐挑战实验.doc

袆第一部分防腐挑战实验调研结果蒃1实验样品螀样本要求新鲜,没有被微生物污染,一般每个样本为300g。、组织、企业对挑战实验选择的测试菌种有一定差异(如表1),国内参照美国化妆品、香精和洗涤剂协会(CTFA)推荐的菌种(因其较具代表性,如表2所示),所以更为恰当。(注意菌株来源问题:同属一个种的细菌来源不同,菌株不同,MIC值不同)薀表1某些国家、组织、企业用于化妆品微生物挑战试验的测试菌株蒇菌株莇美国节(药典)芁美国蒈(ISP公司)蒆英国螁(药典)肁德国蕿(Henkel公司)蚄德国蒅(S&M公司)薂√莈√螂白假丝酵母莇√羆√袄√肅黑曲霉芃√羈√蒀√蒇√蚃√蝿红色青霉芇薅膂葿√莈蚄绿色木霉薁艿莀肆√羁***绳状青霉莄莁袁羇蒅√螄大肠埃希氏菌莀√蚇√芃袂√螀√蒈镉绿假单胞菌芄√羀√腿√膈莅√莃金黄色葡萄球菌蕿√罿√膃√蒁√肈√虿粪肠球菌芄袄螁膅√芆羂产气肠杆菌膁袆肃肀√薀蚆表皮葡萄球菌膄蒃罿莆膆√薁日勾维肠杆菌葿肇羃羄袈√洋葱假单胞菌√√肺炎克雷伯氏菌√恶臭假单胞菌√荧光假单胞菌√表2CTFA化妆品微生物挑战试验的菌株选择种类菌株数量革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌至少选一种表皮葡萄球菌发酵革兰氏阴性杆菌肺炎克雷伯氏菌至少选两种阴沟肠杆菌大肠埃希氏菌变形菌属日勾维肠杆菌非发酵革兰氏阴性杆菌铜绿假单胞菌至少选一种洋葱假单胞菌荧光假单胞菌恶臭假单胞菌黄杆菌属不动杆菌属酵母白假丝酵母至少选一种***、(1)标准悬液的配制1%%***,混合后配制成的悬液浓度为3×108cfu/ml,此悬液再做3倍稀释。(2)细菌菌悬液的配制实验前将菌株接种到各个培养基斜面上,36摄氏度恒温培养48小时。将已培养好的活性菌种,用灭菌生理盐水清洗到灭菌锥形瓶中,充分振荡摇匀。用移液枪从锥形瓶中吸取菌液作稀释,浊度和标准悬液的浊度(3×108cfu/ml)相同为止;此时的稀释菌液再做3倍稀释,即为所需的1×108cfu/ml的菌悬液,做细菌总数确定细菌数。(3)霉菌菌悬液的配制将已培养好的活性菌种,用灭菌的生理盐水清洗到灭菌锥形瓶中,充分振荡摇匀;用移液枪从锥形瓶中吸取菌液作依次的10倍稀释,每次的稀释用血球计数板计数,必须5个中格的霉菌总数在190~210,落在此范围内的菌悬液为我们所需的1×108cfu/ml的霉菌菌悬液,做霉菌总数确定霉菌数。(1)单菌接种:每种测试菌株单独做一个挑战试验。这种方法的优点是容易了解每种微生物对防腐体系的敏感性,在筛选产品的防腐体系时有较好的参考价值,但工作量大、费时、费工,和产品的实际污染菌情况也有差距(因来自自然界的微生物常常不是单一的种类)。(2)混合菌接种:西欧、德国等的许多国家和企业多采用这种方式,除了因工作量相对较小外,这种接种方法更能代表污染的状况。(1)一次接种:只是在试验开始时接种一次,整个试验周期28天。(一次加菌的28天微生物挑战实验)(2)多次接种:在试验开始接种一次后(重复加菌的微生物挑战实验)a法:第21天再接种一次,试验周期为28天。(有实验表明,第21天接菌和不接菌时,第28天时的微生物含量并