PRDX5基因启动子的荧光素酶报告质粒的构建.doc

PRDX5基因启动子的荧光素酶报告质粒的构建.docPRDX5基因启动子的荧光素酶报告质粒的构建摘要:目的构建含PRDX5基因启动子的荧光素酶报告质粒。方法①通过生物信息学方法,查询PRDX5基因启动子核酸序列;②使用PCR扩增人PRDX5基因启动子片段,将启动子插入到pGL3-Basic载体中,构建含PRDX5基因启动子片段的荧光素酶报告质粒;③双酶切及测序确定PRDX5基因启动子的荧光素酶报告质粒扩增正确。结果PCR扩增的PRDX5启动子片段插入到载体中,经测序证实正确。结论成功构建含PRDX5启动子的荧光素酶报告质粒。关键词:PRDX5;启动子;荧光素酶报告基因ConstructionofLuciferaseReporterPlasmidPRDX5GenePromoterHULe-lin(SchoolofMedicine,TheAnhuiUniversityofScienceandTechnology,Huainan232001,Anhui,China)Abstract:ObjectiveToconstructapGL3-PRDX5-promoter-Lucplasmidandtovertifyingitsluciferaseactivity.******@searchthenucleicacidsequenceofthepromoterPRDX5bybioinformaticsanalysis.©-loningvectortoconstructluciferasereporterplasmidwiththepromoterPRDX5•③pGL3-PRDX5-promoter-Lucplasmidwasverifiedbydouble--PRDX5-promoter-Lucplasmidwasidentifiedtobecorrectbydouble--PRDX5-promoter-essfullyconstructed・Keywords:PRDX5;Promoter;Luciferasereporterplasmid;ReactiveoxygenspeciesPRDX5是Peroxiwdoxins(PRDXs)过氧化物酶家族蛋白的一种,研究显示在它广泛表达于哺乳动物的各种细胞,定位于细胞质、过氧化物酶体和线粒体中,但在许多细胞中PRDX5主要定位于线粒体,它与组织过氧化物、过氧化亚硝基阴离子有高的亲和力[l]oMasakishiota[2]等人发现在外源过氧化氢处理或组织缺氧情况下人类前列腺癌PC3细胞PRDX5表达增高。研究还显示人类定位于线粒体的PRDX5能保护线粒体DNA免受过氧化氢的损伤。并且PRDX5能够抑制p53诱导的活性氧簇的产生和细胞凋亡[3]。、质粒和细胞系大肠杆菌tans-5a购自Trans-Gene(全式金)公司;载体质粒pGL3-Basic,由本室保存。DNA重组所用工具酶及试