人和鼠肝微粒体药物代谢检测平台的建立及初步应用研究.pdf

西北大学
硕士学位论文
人和鼠肝微粒体药物代谢检测平台的建立及初步应用研究
姓名:杨芳
申请学位级别:硕士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:陈超
20080610
人和鼠肝微粒体药物代谢检测平台的建立及初步应用研究中文摘要反应,分析生成的产物,计算‰、‰值,根据杭觢ァ獭爰扑隳谠谇宄省!有明显的吸收峰,测得酶含量分别为№.士韌。肝脏是人体重要的生物转化场所,肝细胞的光面内质网舷馇蹲欧岣坏代谢酶,负责内源及外源化合物的代谢。这其中包括主要的嘁┪锎幻福合渖媳A糇耪庑┟浮R虼薍隹梢杂美唇刑逋獾囊┪┪锵嗷プ饔醚芯浚约按晃榷ㄐ缘研究。药物代谢的体外和体内研究数据有一定的相关性,体外研究有助于解释临床数据,可用于评价药物在人体内潜在的代谢情况。采用体外研究早期发现人体内药物代谢的途径和产物,可以为临床前研究提供明确的方向。本研究的目的是建立体外药物代谢研究用的人和鼠肝微粒体药物代谢模型,并对其应用进行初探。首先用改良后的ǎ票窼笫蠛突旌先烁挝⒘L濉V票负玫娜恕术检测肝微粒体对荧光底物、和拇磺榭觯醪脚卸微粒体对的催化活性较弱外,人肝和鼠肝微粒体均可以与底物作用,呈现出明显而稳定的催化活性,在一定范围内荧光信号随着酶浓度增大将肝微粒体与特异性探针底物血簄、甿印”虸同时用、和匾煨砸种萍量⒎幢交繁芳巴?颠蚨匀恕胞色素盎扑氐パ趸。破碎肝细胞后,制备人肝脏微粒体鼠肝微粒体经一氧化碳还原示差法对酶含量进行测定。之后用荧光检测技肝微粒是否具有酶催化活性。定量结果显示制备的人、鼠肝微粒体在通过与四种荧光底物进行多次酶活性检测。除了孜镂廾飨源呋钚裕烁而增大,随着时间的延长而增强。其次用高效液相色谱技术进一步评价肝微粒体药物代谢检测平台的可靠性,鼠肝微粒体进行抑制实验,察看抑制效应强弱,求解值。结果显示:鼠肝微西北大学硕士学位论文
粒体对探针底物舢脚和邢灾拇呋钚裕詂舅簄和化活性,所求得的‰、‰似和杭樱狄灿胛南妆ǖ赖南喾L匾煨砸种萍炼允甿印无代谢;人肝微粒体则对四种特异性探针底物均有明显而稳定的催肝微粒体均无抑制效应,而对人肝微粒体则显示出了较强的抑制效应,值较通过多方面的比较,证明了本研究建立的人、鼠肝微粒体体外药物代谢平台的可行性和可靠性。荧光检测和高效液相色谱检测结果表现出一致性。活性测定结果和抑制作用检测结果表明了人、鼠肝微粒体可用于酶及其相关药物代谢研究的体外模型,使实验结果相互验证。在人肝微粒体与重组人细胞色素酶比较中,证明了采用酶反应活性测定及其选择性抑制作用测定的结合模式具有科学性。总之本研究成功建立了人、鼠肝微粒体药物代谢检测平台,并对其应用进行了初探。关键词:人肝微粒体;鼠肝微粒体;细胞色素;酶动力学分析;荧光检测技术;高效液相色谱检测技术小。西北大学硕士学位论文
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趑学位论文作者签名:夕胁芳西北大学学位论文知识产权声明书谚年耭西北大学学位论文独创性声明本人完全了解西北大学关于收集、保存、使用学位论文的规定。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版。本人允许论文被查阅和借阅。本人授权西北大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所等机构将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》或其它相关数据库。保密论文待解密后适用本声明。学位论文作者签名:指导教师签名:文年石月加日争年拢珼日本人声明:所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,本论文不包含其他