NDM-1分子生物学检测方法.ppt

产NDM-1泛耐药肠杆菌科 细菌感染诊疗指南实验室检测方法解读徐英春北京协和医院产KPC酶的肠杆菌科细菌特征阿米卡星 R氨苄西林 R氨苄西林-舒巴坦 R氨曲南 R头孢唑林 R头孢匹肟 R头孢西丁 R头孢他啶 R头孢曲松 R***霉素 R环丙沙星 R厄他培南 R或I庆大霉素 R亚***培南 R或I左氧***沙星 R美罗培南R或I哌拉西林-他唑巴坦R四环素 R妥布霉素 R复方磺***RMIC(µg/ml)MIC(µg/ml)39KPC产KPC酶的肠杆菌科细菌耐药特点所有的b-内酰***类耐药青霉素类广谱头孢菌素单环B内酰***类碳青霉烯类质粒介导的耐药基因有的菌株同时ESBL(+),***喹诺***类耐药、氨基糖苷类耐药35产KPC酶的肠杆菌科细菌耐药特点黏菌素/多粘菌素敏感MIC≤2µg/mlS替加环素可能敏感(MIC≤2µg/mlS;4µg/mlI;≥8µg/mlR)52NDM-1的检测方法NDM-1,即新德里金属β-内酰***酶-1型,是由细菌质粒上携带的blaNDM-1基因编码的。目前,国际上已有十余篇关于NDM-1的研究性文章或相关部门报告发表。由blaNDM-1编码产生的碳青霉烯酶及因此产生的对碳青霉烯类耐药性可以通过现有推荐使用的表型鉴定方法准确、可靠的鉴定出来[1][1];59(24):750.[2];53(12):5046--S20及CLSIM100-S20-U中碳青霉烯类的折点抗菌药物纸片扩散法(mm)稀释法(mg/L)M100-S20M100-S20-UM100-S20M100-S20-USRSRSRSR多利培南-≥23≤19-≤1≥4厄他培南≥19≤15≥23≤19≤2≥8≤≥1亚***培南≥16≤13≥23≤19≤4≥16≤1≥4美罗培南≥16≤13≥23≤19≤4≥16≤1≥4(一)表型筛查试验纸片扩散法:美罗培南(10ug)或亚***培南(10ug):抑菌圈直径≤22mm肉汤稀释法或Etest法美罗培南或亚***培南:MIC≥2ug/ml亚***培南适合于大肠埃希菌,克雷伯菌属,沙门菌属,肠杆菌属变形杆菌属、普罗威登斯菌属和摩根菌属对亚***培南敏感性下降是由产碳青霉烯酶外的其他机制引起,因此对这些菌株尚未建立用亚***培南MIC法进行筛选和确认碳青霉烯酶,并且亚***培南纸片法对所有肠杆菌科碳青霉烯酶的筛查效果都不好[1];53(12):5046-54.[2];10(9):597-602.(二)表型确证试验纸片扩散法:Etest法:双纸片协同法:改良霍奇试验(modifiedHodgetest)自动化鉴定与药敏仪器[1];53(12):5046-54.[2];10(9):597-602.(二)表型确证试验纸片扩散法:亚***培南(10ug)/亚***培南(10ug)+EDTA(500mM10ul)复合纸片结果判读:复合纸片比单药纸片抑菌环直径增大≥5mm图:复合纸片法判定金属β-内酰***酶示意图(左纸片:亚***培南/EDTA,右纸片:亚***培南)[1];40(10):3798-801.(二)表型确证试验Etest法:Etest®MBL(IP/IPI、MP/MPI)结果判读:单药与复合制剂的MIC比值≥8图:EtestMBL(IP/IPI)[1]/servlet/srt/bio/clinical-diagnostics/dynPage?L_CLN_PRD_G_PRD_CLN_60