紫外可见分光光度计的曲线绘制.doc

一、测定溶液中物质的含量可见或紫外分光光度法都可用于测定溶液中物质的含量。测定标准溶液(浓度已知的溶液)和未知液(浓度待测定的溶液)的吸光度,进行比较,由于所用吸收池的厚度是一样的。也可以先测出不同浓度的标准液的吸光度,绘制标准曲线,在选定的浓度范围内标准曲线应该是一条直线,然后测定出未知液的吸光度,即可从标准曲线上查到其相对应的浓度。含量测定时所用波长通常要选择被测物质的最大吸收波长,这样做有两个好处:⑴灵敏度大,物质在含量上的稍许变化将引起较大的吸光度差异;⑵可以避免其它物质的干扰。二、用紫外光谱鉴定化合物使用分光光度计可以绘制吸收光谱曲线。方法是用各种波长不同的单色光分别通过某一浓度的溶液,测定此溶液对每一种单色光的吸光度,然后以波长为横座标,以吸光度为纵座标绘制吸光度──波长曲线,此曲线即吸收光谱曲线。各种物质有它自己一定的吸收光谱曲线,因此用吸收光谱曲线图可以进行物质种类的鉴定。当一种未知物质的吸收光谱曲线和某一已知物质的吸收光谱曲线开关一样时,则很可能它们是同一物质。一定物质在不同浓度时,其吸收光谱曲线中,峰值的大小不同,但形状相似,即吸收高峰和低峰的波长是一定不变的。紫外线吸收是由不饱和的结构造成的,含有双键的化合物表现出吸收峰。紫外吸收光谱比较简单,同一种物质的紫外吸收光谱应完全一致,但具有相同吸收光谱的化合物其结构不一定相同。除了特殊情况外,单独依靠紫外吸收光谱决定一个未知物结构,必须与其它方法配合。紫外吸收光谱分析主要用于已知物质的定量分析和纯度分析。选几个体积梯度,然后稀释成相同的体积,得到了不同浓度C的几个标准溶液样组,用紫外分光光度计分别测得相应的吸光度A1、A2、A3……,然后要以浓度为横坐标,吸光度A为纵坐标,绘制曲线。当然有时候根据实际需要,也会有小小的变动。配制标准溶液,用紫外可见分光光度计测量,得到浓度与吸光度的曲线,并且利用线性拟合得到回归方程,直接利用Origin的线性拟合功能得到的方程往往截距不等于零,即方程的形式为y=A+Bx。那是否需要强制令A=0,再来进行拟合呢?如果y=A+Bx这样的形式可以,那么A需要多小才是可以接受的?答:如果用样品空白溶液做参比,一般可以设置强制过零点;如果用蒸馏水做参比,一般不能强制过零点。做曲线时一是要带双空白并减去空白A0,二是应加0回归。减去A0是希望消除试验方法固定偏倚对校准曲线的影响,当用校准曲线来估计未知样的浓度时,要考虑到试样的测量吸光度也会受到固定偏倚的影响,如果校准曲线和试样测定过程中出现的偏倚一样,偏倚是无需校正的,可有时两者的操作往往不是同时同批进行的,如由于时间或批次不同,固定偏倚有所变化,那么两者的吸光度就要做不同的校正。即在每批分析时带空白,并对相应的信号进行校正。试验证明加零回归的校准曲线与不加零回归校准曲线比较,两者的r和b值均无差异,但加零回归校准曲线截距a的绝对值明显变小,因此在作校准曲线的回归计算时必须加零回归,使回归线接近原点。截距a对低浓度样品计算却影响甚大。尤其是当样品浓度接近空白浓时,用回归方程计算时会出现负值,这是因为校准曲线回归后截距a>空白信号值所致,并非样品中存在产生负值的物质。用回归方程计算结果将引入一个固定的误差,当a为正时,计算结果为负误差,当a为负时,计算结果为正误差。本来样品的信号值>空白信号值,计算出来的结果却为