血清谷丙转氨酶测定.ppt

血清中谷丙转氨酶的活力测定【目的要求】。。。原理转氨作用:将α-氨基酸的氨基通过酶促作用转移到α-***基上,生成相应的***酸与氨基酸的反应。催化这一反应的酶称为转氨酶。转氨酶广泛存在于机体的各种组织中。在肝、心、肾等组织中,谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)的活性均较高。在正常的新陈代谢过程中,血清内两种酶维持一定水平的转氨酶活性(即正常值)。谷丙转氨酶glutamic-pyruvictransminaseGPT谷草转氨酶glutamicoxaloacetictransaminaseGOT当肝、心、肾等组织发生病变时,由于组织细胞肿胀、坏死导致大量的酶释放到血流中,从而引起血清谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)活性显著升高。因此测定这些酶的活性对某些疾病的临床诊断具有重要的参考价值。本试验用丙氨酸和α-***戊二酸为底物(基质液成分)经血清谷丙转氨酶作用生成谷氨酸及***酸。***酸可与起终止和显色作用的2,4二硝基苯肼发生加成反应,生成***酸-2,4-二硝基苯腙,进而在碱性环境中生成红棕色的苯腙硝醌化合物,其颜色的深浅在一定范围内与***酸的生成量,亦即与ALT活性的高低成正比关系。据此与同样处理的***酸标准液相比较,便可算出或通过标准曲线查出血清中ALT的活性。反应过程如下:H3NO2NHNNO2+***酸-2,4-二硝基苯腙棕红色,520nm处具特征光吸收,颜色深浅(OD520值)与***酸含量成正比,可据此进行比色测定。2,4-H2CH3COOHCO(CH2)H2(CH2)2COOH++谷丙转氨酶AlaGluα-KG***酸King氏法谷丙转氨酶活性单位:每毫升血清在37℃,生成1umol***酸为一个活力单位。,报告数据以100ml血清计算,因此实际侧得结果乘1000即可。实验材料及试剂实验材料:动物或人血清实验试剂:***酸标准液要求临用前配制;四、实验操作标准曲线的绘制试剂管号012345***酸标准液,ml基质液溶液,ml磷酸缓冲液,,4-℃,于520nm处测吸光度⑴、标准曲线的制作以表1中的A520为纵坐标,酶活性单位为横坐标,绘制标准曲线。⑵、样品中转氨酶活性的计算根据样品管的A520查标准曲线,即得每100ml血清转氨酶的活性单位数。