以包涵体形式在大肠杆菌中表达人组织激肽释放酶融合蛋白.pdf

从真菌中寻找 SR-蛋白特异性激酶 SRPK1

(理学院应用化学系应用化学专业(食品科学方向) 罗颖茜)
(学号:2000141062)

内容提要:以真菌香菇、凤尾菇和三种不同木霉为主要材料进行 SDS-聚丙稀酰胺凝胶电
泳,用免疫印迹法检测特异性蛋白激酶 SRPK1。分析结果显示绿色木霉 B、香菇、凤尾菇在
特异的免疫检测中显现出阳性谱带。以考马斯亮蓝染色的结果为依据,绘制标准蛋白质分子量
的标准曲线,然后计算出样品蛋白的分子量。结论:SR 蛋白特异性激酶(SRPK1)有可能存
在于上述三种真菌细胞中。
关键词:SRPK1 ,SDS-PAGE , 免疫印迹, 真菌
教师点评:该研究是刑苗教授主持的广东省自然科学基金项目的一部分。除裂殖酵母外,
在真菌中还未发现 SR 蛋白激酶-SRPK1 的存在。该课题难度极大。罗颖茜同学在老师的指导
下,利用 SDS 蛋白电泳以及免疫印迹法在真菌中寻找 SRPK1 类似激酶。检测到在香菇(Lentinus
edodes)、凤尾菇(Pleurotus sajor-caju)、绿色木霉 B(Trichoderma virideB)有明显的阳性反
应,为进一步研究 SRPK1 类似激酶在上述真菌中的存在打下基础。该研究方法科学、严谨,
结果显著。(点评教师:郑宗坤,副教授)

1. 前言
SR-蛋白
RNA 剪接研究中重大得发现之一是选择性剪接(alternative splicing),即在同一个基因中,其
剪接位点和形式可以改变,从而导致一个基因能产生多个具有明显差异的蛋白质物质。而剪接
的基本要素就是 SR- SR 蛋白无剪接活性的细胞组分中,加入 SR-蛋白可恢复剪接活
性。他们在将 mRNA 前体组装进剪接体的起始阶段起了至关重要的作用。在体外剪接反应分
析时,SR-蛋白具有类似的功用,也就是说,SR-蛋白家族的任何成员都能使缺少 SR-蛋白无剪
接活性的细胞提取液恢复剪接功能。SR-蛋白是剪接体组装和 RNA 剪接的关键因子,特别是
罗颖茜:从真菌中寻找 SR-蛋白特异性激酶 SRPK1 · 2·

在剪接体形成的早期阶段,其作用更为显著,且这种功能作用很可能是通过蛋白键 SR 区段的
相互作用而实践的。因此,揭示 SR-蛋白的功能作用成为 RNA 剪接研究中的主要热点之一[1]。
SR-蛋白家族有 8 个成员,他们是 SF2/ASF,SC35,SRp20,SRp55,U2AF65,U170K 以及
tra 和 su 等。这个蛋白家族成员的氨基酸顺序具有两个共同的特征:(1)具有一个或多个 RNA
识别结构(RNA recognition motif,简称 RRM);(2)都含有一个或多个富含 SR(S-丝氨酸,
R-精氨酸)二肽重复序列的区段。SR-蛋白就是因其含有 SR 区段而得名[2] 。
. SR 蛋白特异性激酶— SRPK1 的发现
90 年代初期,正值细胞周期调控研究的高峰时期,大量的研究很快发现,有丝分裂过程
中细胞器和细胞内结构的去组装和重新组装大多是由于特定蛋白的磷酸化和去磷酸化引起的。
即是激酶(kinase)和磷酸激酶(phosph-atase)作用的结果。SR-蛋白能被有丝分裂中期细胞
提取液高度磷酸化的结果使我们相信 SR-蛋白是磷酸化蛋白,细胞提取液中必定存在催化其磷
酸化的激酶。此激酶便是 SRPK1。是Gui等在探寻剪接因子在细胞周期过程中重新分布的
机理时鉴定并克隆出来的。
. SRPK1 的功能
在 SRPK1 被鉴定及其底物特异性明朗之后,研究者很自然地将注意力转向了 SRPK1 与
细胞周期的相关的研究,并试图通过这一研究,重新架起 RNA 剪接与细胞周期调控的桥梁,
寻找到新的线索。
有研究表明,活体中的 SR-蛋白磷酸化是细胞周期调节的。分析细胞周期不同时期的
SRPK1 活性,结果表明,中期细胞提取液中的 SRPK1 活性要比间期细胞中高 3-5 倍。并且,
SR-蛋白在活体中的磷酸化差异和 SRPK 在不同时期细胞提取液中的活性差异是一致的[4]。
这就意味这活体中的 SR-蛋白磷酸化是 SRPK 导致的,而且都是细胞周期调控的。
SRPK1 经过氨基酸测序所获得的三个肽链完全一致的氨基酸顺序,并含有丝氨酸/苏氨酸
,还含有两端主要由赖氨酸(K)组成的碱性氨
基酸顺序,它们可能具有核内定位信号(nuclear targcting signals)的功能作用[5]。SRPK1 的激
酶区被很长一段间隔序列分成二半