实验七 酶的性质影响因素实验.doc

实验七酶的性质影响因素实验一、目的要求了解酶的活性影响酶促反应与pH、温度、抑制剂和活化剂对酶活性的重要影响。二、原理影响酶活性的因素比较多,如温度、pH、活化剂、抑制剂等,本实验就这些因素对酶活性的影响进行试验。酶活性对pH极为敏感,每种酶通常只能在一定pH范围内表现活力,并且有一个表现为具有最高活性的pH,偏离最适pH较远,酶的活性越低,甚至消失,不同酶有不同的最适pH,,。~,。不同酶的最适pH值不同。然而,酶的最适pH受底物性质和缓冲液性质的影响。例如,在磷酸缓冲液中,-,。酶的活性受温度的影响也很大。一般说来,在一定温度范围内,酶活性随温度升高,活性增大,并且有一个使活性达到最大值的最适温度,偏离最适温度越远,酶的活性越小,甚至丧失(一种酶的最适温度,并非完全固定,它可受作用时间的长短,pH的变化等因素影响,一般作用时间长,最适温度低,而作用时间短,则最适温度高。但一般来说,偏离值不会很大)。人的唾液淀粉酶活性随着温度的升高而升高,直到37℃左右,温度更高时酶的活性则下降。有些酶促反应需要加入某种物质,反应速度才加快,如唾液淀粉酶遇Cl-时,活性增高,这种增高酶活性的物质,称为活化剂,其它的阴离子,如Br-、NO3-和I- 对该酶也有激活作用,但较微弱;相反,在酶促反应中,有些物质能足以阻抑酶促反应速度,这种物质称为抑制剂,如Cu2+就是唾液淀粉酶的抑制剂。激活剂和抑制剂影响酶活性的剂量是很少的,并且常具有特异性。所以,酶的活性有时还受其它一些物质的影响。在本实验中,以稀释的唾液作为淀粉酶液。唾液内的淀粉酶可将淀粉逐步水解成各种不同大小的糊精分子,最终产物为麦芽糖和少量的葡萄糖。它们遇碘呈不同的颜色。直链淀粉(即可溶性淀粉)遇碘呈蓝色;糊精按分子从大到小的顺序,遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色和红色或橙黄色,最小的糊精和麦芽糖遇碘不显颜色:由于在不同温度,不同pH,或者在有激活剂或抑制剂存在的条件下唾液淀粉酶的活性高低不同,则淀粉被水解的程度不同,所以,可由酶反应混合物遇碘所呈现的颜色来判断,从而可了解上述诸因素对酶活性的影响。但需注意在碱性条件下碘会发生歧化反应,部分碘形成无色的碘酸盐、次碘酸盐,此时应增加碘液加入量。上述四种因素是影响酶活性的几种主要因素,因而也是影响酶反应速度的主要因素,酶活性高,与之作用的一定量的底物反应时间就越短,反之则长。故可用时间来表示影响酶活性的强弱。三、实验材料、器材与试剂(一)实验材料1.  唾液淀粉酶的制备(1)  提取:实验者先用水漱口清洁口腔,然后含一小口(约5mL)蒸馏水于口中轻嗽一、二分钟。(2)  稀释:将酶提取液用水定容至100mL。作为唾液淀粉酶的样品液。(由于不同人或同一人不同时间收集到的唾液淀粉酶的活性并不相同,稀释倍数可以是50~300倍,甚至超过此范围。)(二)(三);%CuSO4溶液;%NaCl的1%淀粉溶液:%NaCl溶液,%NaCl溶液混合,之