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小鼠乳腺上皮细胞体外原代培养方法研究进展
摘要综述了有关于小鼠乳腺上皮细胞体外原代培养方法的研究进展,阐述了乳腺细胞培养的意义,介绍了乳腺组织原代培养的过程,
并分析了所取得的研究成果。
关键词小鼠;乳腺上皮细胞;原代培养;细胞工程
原代培养即直接从有机体摘取细胞、组
织或器官,使其在体外维持与生长。合适的培养条件对体
外培养细胞的生存和增殖都十分重要。一般而言,不同动
物、不同组织器官来源的细胞对培养条件的要求存在一定差
异,因此,需要使体外环境下的培养条件尽可能地模拟体内
环境。体内乳腺组织的增殖、分化和组织结构重塑受内环境
(如类固醇、生长因子、结合蛋白及细胞外基质间复杂的相互
作用等)因素的影响和作用,这些因素同样也影响体外培养
乳腺上皮细胞的增殖分化和功能表现。对于某种动物特
定组织细胞的体外培养,对培养液、添加因子、附着底物及培
养温度、pH值等都需进行仔细的选择,乳腺上皮细胞的体外
培养建立在乳腺上皮原代培养细胞的基础上,针对不同的研
究目的应采取不同的培养方法,以对细胞进行分化诱导。
张以涛比较了不同pH值、不同血清浓度配比的生长培养液
对小鼠乳腺上皮细胞生长的影响,结果表明, pH值7. 4含
10%血清的培养基为最佳生长液。现代研究普遍认为,内
分泌激素在乳腺上皮细胞发育各个阶段都发挥影响作用,不
同时期乳腺组织的形态、组成及功能均有差异,这对选择乳
腺上皮细胞体外培养的取材时间有指导意义。张以涛比
较了取自不同时期乳腺上皮细胞的生物学特性,得出妊娠期
细胞生存、增殖能力均强于泌乳期细胞,妊娠期小鼠乳腺为
获得细胞的最佳取材时期。乳腺上皮细胞的原代培养,首
先是尽可能地分离出乳腺上皮细胞,同时减少分离过程对细
胞的损伤和浪费,以及通过采用一定的方法,使最终得到富
集的乳腺上皮细胞及杂质细胞尽可能少甚至被完全清除。
1 乳腺细胞培养的意义
将动物细胞或组织在体外进行培养,能有效排除神经体
液等因素对其造成的影响,可直接进行药物对细胞的活动代
谢、毒性和杀伤作用等检测,如秦君等以王不留行为试验材
料,对其3类主要成分(皂甙类、黄酮甙类及香豆素类)进行
提取,分别以不同浓度添加到细胞培养液中,寻找王不留行
促进泌乳的有效成分。与细菌相比,可合成并分泌蛋白质
的细胞具有修饰功能,若对外源基因进行表达,则可生产出
许多与人类健康和生存密切相关的生物技术产品。自从
Gordon等应用转基因技术从哺乳期小鼠的乳腺中分泌人组
织源性纤维酶原激活剂以来,对乳腺生物反应器的研究得到
了迅速发展,让外源基因在哺乳动物的乳腺中特异表达,
使转基因动物的乳腺组织可直接生产药用蛋白已成为近年
来生物技术领域新的研究热点,世界各国对转基因动物乳腺
生物反应器的研究极为重视。利用人工培养的动物细胞
繁殖病毒,大大减少了用病毒直接在动物体进一步繁殖而造
成的经济损失。此外,乳腺上皮细胞是乳腺的主要组成和分
泌功能成分,而乳腺癌属高发病,国内外许多研究者都研究
乳腺癌的发生发展机理,这使乳腺上皮细胞培养进一步受到
了重视。
细胞培养工程正在逐步形成一支独特的高新技术产业,
并显示出巨大的工业发展前景。许多科学家把乳腺视为
一种理想的试验模型系统,用以研究解决许多基