NFκB介导促红细胞生成素神经细胞保护作用的研究.doc

NFκB介导促红细胞生成素神经细胞保护作用的研究
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
作者:董文斌, 侯红梅, 王琼, 陈枫, 航永伦
【摘要】目的: 观察促红细胞生成素(EPO)对谷氨酸(Glu)诱导的大脑皮质神经元损伤的保护作用和核因子κB(NFκB)介导的细胞内信号转导机制。方法: 采用1日龄Wistar大鼠皮层神经细胞体外原代培养技术, 建立Glu兴奋性毒性神经细胞损伤模型。实验分为正常对照组、 Glu组、 EPO组和吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC, NFκB活化阻断剂)组。倒置显微镜下观察细胞的形态学改变; MTT法测定细胞存活率; 流式细胞术测定细胞凋亡率评价细胞损伤程度。结果: Glu处理后神经细胞形态明显受损, EPO组神经细胞形态趋于正常, PDTC组细胞形态与Glu组相似; 与正常对照组相比, Glu组神经细胞存活率明显下降、凋亡率明显升高, 差异均有统计学意义(); 而与Glu组相比, EPO组神经细胞存活率明显增高下降、凋亡率明显下降, 差异均有统计学意义()。与EPO组相比, PDTC组细胞存活率明显下降、凋亡率明显升高, 差异均有统计学意义(), 这些变化与Glu组相似。结论: EPO对Glu诱导的大脑皮质神经元损伤的具有保护作用, 其胞内信号转导机制涉及到NF
κB的活化。
【关键词】促红细胞生成素谷氨酸神经元核因子κB 信号传导
新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxicischemicencephalopathy, HIE)是导致儿童伤残的重要疾病之一。谷氨酸(glutamate, Glu)的大量释放是其神经细胞损伤的主要原因[1]。研究显示: 促红细胞生成素(erythropoitin, EPO)对Glu诱导的神经细胞损伤具保护作用[2, 3], 其胞内信号机制尚不清楚,国外研究认为核因子κB(NFκB)活化介导其信号传导过程[3, 4]。本研究在前期工作的基础上[1, 3], 进一步从NFκB活化途径探讨EPO对Glu诱导的神经毒性的保护机制。
1 材料和方法
材料 Wistar新生大鼠(1日龄)由泸州医学院标准动物科提供; Neurobasal Medium(NM), B27系Gibco公司产品; Glu, RPMI1640, 四***偶氮唑盐(MTT)均购于Sigma公司; 小牛血清系成都美特科技有限公司产品; EPO购于成都地奥制药公司; 四氢吡咯烷二硫氨基甲酸酯(PDTC)为Sigma公司产品; Annexin VFITC凋亡检测试剂盒购于达克为生物技术有限公司; 流式细胞仪(Epics型)pany产品; 倒置显微镜(XSJD型)为Olympus产品。

方法

大脑皮层神经细胞原代培养取1日龄的新生大鼠, 碘酒和750 mL/L的乙醇消毒皮肤后取双侧大脑皮质, 剔除软脑膜和血管。Hank
’s液冲洗2遍。 g/L胰蛋白酶常温下消化5 min, 1000 r/min离心10 min, 弃上清, 用含100 mL/L小牛血清的RPMI1640悬浮混匀, 制成1×106/L密度的细胞悬液。接种于96孔培养板(100 μL/孔),