STAT3SURVIVIN途径介导槲皮素调控胃癌细胞增殖和凋亡.doc

STAT3SURVIVIN途径介导槲皮素调控胃癌细胞增殖和凋亡
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)

【摘要】目的: 观察STAT3SURVIVIN途径在槲皮素调控胃癌细胞SGC7901增殖和凋亡中的作用. 方法: 不同浓度的槲皮素及阳性对照组(AG490 40 μmol/L)作用细胞后,MTT法检测细胞毒作用;流式细胞术检测细胞凋亡;Real time RTPCR, Western Blotting检测stat3,survivin基因mRNA及蛋白的表达. 结果: 随作用时间延长和浓度增高,槲皮素对SGC7901细胞增殖的抑制作用增强. 48 h槲皮素40 μmol/L组与阳性对照组凋亡率相近. Stat3,survivin mRNA之间呈直线相关关系(r=,P=),且pstat3和survivin蛋白也呈直线相关关系(r=,P=). 结论: 槲皮素可能通过调控STAT3SURVIVIN途径抑制胃癌SGC7901细胞增殖并诱导凋亡.
【关键词】 stat3基因 survivin基因槲皮素胃肿瘤细胞增殖细胞凋亡信号转导通路
0引言
槲皮素(quercetin, Que, 3, 3
′, 4′, 5′, 72五羟基黄酮)又称槲皮酮,为中药槲树皮的主要提取成分,具有广泛的药理活性,如抗炎、抗肿瘤等. Stat3,survivin是继bcl2之后相继发现的两个重要的凋亡抑制基因. 大量体内外研究表明抑制这两种基因的表达或功能可以抑制肿瘤细胞生长,促进凋亡[1-2]. 黄酮类抗肿瘤药槲皮素是否通过抑制STAT3SURVIVIN途径促使肿瘤细胞调亡,目前尚属未知. 我们施用槲皮素于胃癌SGC7901细胞,观察STAT3SURVIVIN途径在槲皮素调控胃癌细胞增殖和凋亡中的作用.
1材料和方法
,由兰州大学分子生物学教研室提供;干粉型RPMI1640,槲皮素,DMSO,AG490购自Sigma公司;胎牛血清购自杭州四季青公司;MTT购自Inventrogen公司;总RNA柱式提取试剂盒购自BBI公司;Real Time PCR试剂盒购自宝生物工程(大连)有限公司. Stat3上游引物: 5′AGGCAGAAG3′,下游引物: 5′ATCGCTGACA3′,扩增产物114 bp;survivin上游引物:5′TG3′,下游引物: 5′TCACTGCGGCTGTC3′,扩增产物127 bp;内参照GAPDH上游引物:5′ATCTGA3′,下游引物:5′A3′,扩增产物138 bp,均由宝生物工程(大连)有限公司合成. 兔抗人stat3多克隆抗体购自Cell Signal公司;兔抗人survivin多克隆抗体购自Santa Cruz公司.

mL/L胎牛血清的RPMI
1640培养基中培养, 37℃,50 mL/L CO2孵箱中贴壁生长, g/L胰酶消化传代. 实验分为空白对照组,阴性对照组( mL/L DMSO),阳性对照组(AG490 40 μmol