阿尔茨海默病模型大鼠Tau 蛋白异常磷酸化表达及补肾化痰法的干预作用.doc

阿尔茨海默病模型大鼠Tau 蛋白异常磷酸化表达及补肾化痰法的干预作用
(作者:___________单位: ___________邮编: ___________)
作者:胡慧,王平,孔明望,丁凤敏
【摘要】目的探讨补肾化痰法对AD模型大鼠Tau蛋白异常磷酸化的影响。方法应用脑立体定向技术给大鼠Meynent基底核注射凝聚态Aβ25-35+IBO构建AD模型。注射2周后,高、中、低量组分别给大鼠该药水煎液灌胃;西药组用哈伯因混悬液灌胃;正常组、空白组、模型组均给予等容积的生理盐水灌胃。28 d后采用蛋白免疫印迹法检测海马匀浆中Tau蛋白磷酸化总量。结果正常组与空白组海马区Tau蛋白磷酸化水平无明显差异(),模型组海马区Tau蛋白磷酸化水平显著增加(),给药后发现不但大鼠海马组织Tau蛋白异常磷酸化水平下降,高、中量组与模型组比较显著降低(P ),与西药组也有差异() 。结论补肾化痰法可以降低Tau蛋白异常磷酸化水平,从而发挥其抗老年性痴呆的作用。
【关键词】阿尔茨海默病;Tau蛋白;补肾化痰法
阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种以进行性记忆障碍和智能衰退为主要临床特征的中枢神经系统退行性疾病,随着人口老龄化的日趋严重,AD已经成为危害老年人健康的主要疾病之一[1]。AD患者的特征性病理改变包括神经原纤维缠结(Neurofibrillary tangle,NFT)、老年斑(Senile plaques ,SP)和颗粒空泡变性。NFT在神经元胞体内,由高度磷酸化的Tau蛋白聚集形成,其数目和AD的痴呆程度密切相关,因此有人认为Tau蛋白的过度磷酸化是AD 的核心病变[2]。本实验观察了补肾化痰法对AD模型大鼠Tau蛋白异常磷酸化的影响,以探讨补肾化痰法对AD神经保护作用机制。
1材料与仪器
、石菖蒲、竹节参、茯苓、陈皮、半夏、白芥子等组成,购自湖北中医学院国医堂门诊部。中药经水煎制成浓缩液。哈伯因,河南众生制药股份有限公司豫中制药厂产品,批号:060321。
-35和IBO购于Sigma公司,免疫印迹化学发光试剂(ECL)、BCA蛋白浓度检测试剂盒、预染的蛋白Marker、PVDF膜、蛋白提取试剂盒购自北京普利莱基因技术有限公司。兔抗大鼠磷酸化Tau抗体(PHF-1) 购自abcam 公司,HRP标记的羊抗兔二抗购自武汉博士德生物工程有限公司。
(DYY-4C)、垂直电泳槽、电转移槽、凝胶成像扫描仪均为北京六一仪器厂生产。
2方法
,雌雄各半,体质量(450±50)g,随机分为7组,每组10只。由湖北省实验动物研究中心提供。实验分组:①Aβ25-35+IBO模型组(简称模型组);②假手术组(简称空白组);③正常组;④哈伯因治疗组(简称西药组);⑤补肾化痰法高剂量组(简称高量组);⑥补肾化痰法中剂量组(简称中量组);⑦补肾化痰法低剂量组(简称低量组)。
2%戊巴比妥钠(40 mg/kg)腹腔注射麻醉后,固定于脑立体定位仪上,颅顶正中切开暴露至颅骨,根据大鼠颅脑立体定位图谱,对基底核立体定位(位置:前囟后