人参皂苷Rg1对抗脑缺血再灌注大鼠脑组织FAS、FASL蛋白表达的定量分析.doc

人参皂苷Rg1对抗脑缺血再灌注大鼠脑组织FAS、FASL蛋白表达的定量分析
作者:刘霞包翠芬魏嘉梁佳秦书俭
【摘要】目的:探讨人参皂苷Rg1对脑缺血再灌注大鼠脑组织FAS、FASL表达的影响。方法:取健康雄性SD大鼠30只。将其随机分为假手术组,模型组,人参皂苷Rg1 10、20、40 mg/kg组,阳性药物对照组,每组5只。采用线栓法制作大脑中动脉栓塞模型。于MCAO术后6小时,采用免疫印迹法对CA1 区的FAS、FASL蛋白表达情况进行定量检测。结果: 模型组大鼠大脑右侧海马CA1区FAS、FASL含量最高;假手术组FAS、FASL含量最低;Rg1 20、40 mg/kg组的FAS、FASL蛋白含量显著降低,与模型组比较有显著性差异(P<),其中Rg1 40 mg/kg组FAS、FASL蛋白含量最低。结论:人参皂苷Rg1防治大鼠脑缺血再灌注损伤的机制可能与抑制脑组织FAS、FASL表达有关,且以高剂量效果较好。
【关键词】人参皂苷Rg1; 脑缺血再灌注; FAS;FASL; 免疫印迹
免疫印迹技术(Western blot)是目前科研中较常用的蛋白定量检测方法之一,该法具有灵敏、高效等特点。本实验拟采用Western blot法对脑缺血再灌注(cerebral ischemia reperfusion,CIR)后大鼠海马CA1 区神经细胞FAS、FAS
L的表达进行定量检测,并观察人参皂苷Rg1 对FAS、FASL蛋白表达的影响,以明确人参皂苷Rg1 是否通过调控FAS、FASL蛋白的表达来抑制CIR损伤后的神经细胞凋亡。
1 材料与方法
实验动物及分组
取健康雄性SD大鼠,饲养7天后随机分为 6 组:①假手术组;②模型组;③ Rg1 10 mg/kg组;④ Rg1 20 mg/kg组;⑤ Rg1 40 mg/kg组;⑥阳性药物对照组;每组 5 只大鼠。③~⑤组分别于术前 5天至取材当日连续腹腔注射人参皂苷 Rg1;⑥组注射尼莫地平注射液,①、②组分别注射 ml等渗生理盐水,均为 1 次/d。
主要实验药品
人参皂苷Rg1(纯度>95%),吉林大学有机化学教研室;尼莫地平注射液,山西亚宝药业,批号071001;兔抗鼠FAS、FASL (Ser63)单克隆抗体,SANTA CRUZ公司;Marker预染蛋白质分子量标准、BCA 、NBT/BCIP、PMSF,碧云天生物技术研究所;其余试剂由辽宁医学院科学实验中心提供。
大鼠右侧局灶性脑缺血模型的制备
10%水合氯醛(350 mg/kg)腹腔麻醉,模型制作采用改良线栓法[1]。,由右侧颈总动脉分叉部缓慢向颈内动脉颅内方向插入约(±)mm,使线头通过大脑中动脉起始处,阻断大脑中动脉的血流;假手术组插入深度<15 mm。阻塞后2 h,将尼龙线轻轻拔出行再灌注,再灌注时间为22 h。
免疫印迹检测及强度分析
MCAO术后24h,取各组大鼠5只,迅速断头取出右侧海马置于液氮冷冻,-80℃冰箱保存。取冷冻脑组织,加入RIPA裂解液,剪碎、超声波粉碎20s后静置30min, 4℃,12 000r/min 离