淋巴毒素α基因单核苷酸多态性与脑梗塞的相关性研究.doc

淋巴毒素α基因单核苷酸多态性与脑梗塞的相关性研究
【摘要】目的:检测淋巴毒素α( lymphotoxin α,LT- α)C804A位点单核苷酸多态性与河南汉族人群脑梗塞的关系。方法:PCR 扩增、产物纯化后直接测序对30例脑梗塞患者和20例健康对照者进行基因型分析。结果:LT- α-C804A位点检测出C/C、C/A、A/A三种基因型。病例组中C/C、C/A、A/%、%、%;对照组中分别为20%、55%、25%,两组比较有统计学意义(P=)。病例组与对照组中C、A 等位基因频率分别为35%、65%%、%,两组比较有统计学意义(P=)。结论:LT- α-C804A基因单核苷酸多态性与河南汉族人群脑梗塞发生有相关性,LT- α-C804A 位点C→A的基因突变可能是脑梗塞患者的一个危险因子。
【关键词】脑梗塞;单核苷酸多态性;淋巴毒素α
脑梗塞是一种常见的脑血管疾病,主要由于脑部血液循环障碍导致缺血、缺氧而引起脑组织软化坏死的一种疾病,它的发病率、致残率、病死率均很高,严重危害人类的健康[1]。长期以来人们认识到脑梗塞的发生与引起动脉粥样硬化的因素如高血压、糖尿病、高血脂等危险因素相关,但这并不能解释所有病人发病。因此,必须寻找新的危险因素,以期对高危人群进行早预防、早诊断、早治疗。研究发现LT -α可以调节炎症免疫反应,增加冠心病和心肌梗死的发病危险,但LT -α-C804A位点单核苷酸多态性与河南汉族人群脑梗塞的关系目前尚未见报道。
1研究对象和方法
:在河南地区汉族人中,选取脑梗塞病人30例,年龄、性别匹配的对照组20例。

:每一研究对象于清晨空腹采集外周静脉血3mL, 提取血液基因组DNA。
扩增:PCR反应体系为25uL,其中2×Taq PCR MasterMix L,模板DNA ,上游引物(5’-GTT GGC CTC T TCA -3’)和下游引物(5’-TGG ATG CTT GGG TTC CTG- 3’) uL加双蒸水补至25μL,以上试剂为TIANGEN公司提供。PCR扩增条件为:94 ℃预变性 5 min, 94 ℃变性 50 s, ℃褪火 50s, 72 ℃延伸 45 s, 35个循环后,72 ℃再延伸 5 min, 4 ℃保存。取5uLPCR扩增产物与1uLbuffer混匀,%的琼脂糖凝胶电泳、EB染色,若在紫外灯下出现678 bp一条清晰条带,且无特异性杂带为阳性目的片段。
、回收及直接测序:PCR 产物回收试剂盒(TIANGEN公司) 进行目的片段的纯化回收。回收产物DNA 测序仪直接测序( 北京博尚生物技术有限公司) 。
:用检验分析病例组与对照组是否有差异;两基因间各基因型和等位基因的相对风险度采用比值比(odds ratios,OR) 和 95%可信区间(CI)比较。所有检验为双侧概率检验,以P<。
2结果
:河南汉族人群中30例脑梗塞患者和20例健康对照者LT- α-C8