以兔去上皮浅层角膜为载体体外培养角膜缘上皮细胞的实验研究.pdf.pdf

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安徽医学年第卷第期
以免去上皮浅层角膜为载体体外培养角膜缘上皮细胞的实验研究
沈培清廖荣丰王明丽朱关玲
摘要目的建立以免去上皮浅层角膜为载体体外培养兔角膜缘上皮细胞的培养方法,观察细胞生物学特
性。方法用含%胎牛血清的/:培养液对兔角膜缘上皮细胞进行体外组织块法原代培养,待细胞形成
单层后,传代种植于去上皮浅层角膜载体上。每天用倒置显微镜观察培养细胞的形态及生长情况,电镜观察培育细胞的
超微结构并采用染色和抗增殖细胞核抗原—,单克隆抗体免疫细胞化学染
色对生长于去上皮浅层角膜载体上的细胞进行检测。结果原代培养时,小时后可见组织块边缘有细胞生长游出,
天左右,细胞汇合成单层。传代种植于载体上,细胞小时贴壁伸展,第天可见部分区域细胞逐渐融合成片,天
左右细胞形成良好单层。细胞呈卵圆形或多边形,类似角膜上皮细胞;电镜下,可见细胞表面有许多微绒毛,细胞间有桥
粒连接;免疫细胞化学染色显示部分细胞单克隆抗体呈阳性反应。结论含%胎牛血清的/培养液
适合角膜缘干细胞的体外培养,并能成功地在去上皮角膜浅层载体上培养出类似生理状态下的角膜上皮细胞。
关键词去上皮浅层角膜;角膜缘上皮细胞;细胞培养

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角膜缘干细胞移植是治疗角膜缘损伤导致干细胞
材料与方法
功能障碍性眼表疾病的新方法,角膜缘干细胞的体外
一
培养是进行细胞移植的基础,通过体外培养将少量干、材料
细胞扩增并保持其原始细胞特性,,细胞培养箱
损伤导致的眼表疾病具有重要意义。体外培养的单层型,美国倒置显微镜一,重
角膜上皮细胞移植,由于无载体,细胞移植后常出现粘庆光学仪器厂,台式高速离心机一,上海安
附障碍,细胞逐渐死亡、脱落。我们设想采用去上皮浅亭科学仪器厂,扫描电镜一型,日本电子
层角膜为载体培养角膜缘上皮细胞,试图解决体外培公司, —细胞培养液::胎牛血
养细胞移植后存在的细胞粘附问题。清杭州四季青公司,鼠抗兔增殖细胞核抗原—
单克隆抗体武汉博士德公司,试剂盒天津
作者单位: 合肥安徽医科大学第一附属医院眼科
安徽医科大学微生物教研室王明丽
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津脉,显色剂天津津脉。消化,得到细胞悬液,高速离心获取细胞,置于
.培养液配置配制—:: /戊二醛溶液中固定小时, 锇酸固定,
细胞培养液,其中含有%胎牛血清、/碱性成乙醇梯度脱水,于液态,临界点干燥,扫描电镜观
纤维细胞生长因子—察。免疫细胞化学染色检查:细胞传代培养第天,
、/胰岛素、谷氨酰胺、./ 兔去上皮浅层角膜载体上培养的细胞形成~层后,
氢化可的松、/葡萄糖、双抗/青霉素和进行单克隆抗体免疫细胞化学染色检查,一抗
/链霉素。为鼠抗兔增殖细胞核抗原单克隆抗体博士德生物工
.去上皮浅层角膜载体取材与处理耳缘静脉程有限公司,二抗为标记的羊抗鼠单克隆抗体
注射空气针处死白兔,无菌条件下摘除眼球,分离浅层天津津脉,显色剂天津津脉,单克
角膜片约/角膜厚度,放入无水甘油中脱水