中国人家族性肌萎缩侧索硬化患者SOD1基因突变的分子生物学研究.pdf

福建医科大学
硕士学位论文
中国人家族性肌萎缩侧索硬化患者SOD1基因突变的分子生物学
研究
姓名:牛艳芳
申请学位级别:硕士
专业:神经病学
指导教师:吴志英;王柠
2011-04
中国人家族性肌萎缩侧索硬化患者 SOD1 基因
突变的分子生物学研究

摘要
目的:
1、研究中国家族性肌萎缩侧索硬化患者的 SOD1 基因突变特征,结合其临
床特点,分析基因型与临床表型的关系。
2、针对发现的突变构建真核表达质粒,为研究该基因突变导致肌萎缩侧索
硬化发病机制奠定基础。
方法:
1、采用 PCR、结合 DNA 直接测序的技术,对 8 例临床诊断为家族性肌萎
缩侧索硬化(FALS)患者的 SOD1 基因外显子及其内含子交界区域进行变异检
测。
2、结合基因检测的结果对各个家系临床特点进行分析。
3、通过限制性内切酶技术、T4 连接、定点诱变等基因重组的技术构建野
生型和两种突变体的真核表达质粒 SOD1cDNA/- 和
SOD1cDNA/PEGFP/N2。
结果:
1、在 8 例家族性 ALS 患者中发现 3 例患者携带两种 SOD1 突变(Cys111Tyr
和 Gly147Asp),这两种突变为中国人群中首次报道。
2、根据基因型与临床表型相关性分析的结果初步推测 Cys111Tyr 突变导
致的临床表型相对温和,而 Gly147Asp 突变可导致病情较快进展。
3 、成功构建了野生型及 Cys111Tyr 、 Gly147Asp 的
SOD1cDNA/ 和 SOD1cDNA/PEGFP/N2 真核表达质粒,测序验证目
的基因序列正确。
结论:
1、本次研究在中国家族性肌萎缩侧索硬化患者中进行了 SOD1 基因突变
筛查,首次在中国人群中检测出 Cys111Tyr 和 Gly147Asp 两种错义突变,进一步
4
扩大了中国 ALS 患者 SOD1 基因的突变谱,对研究中国 FALS 患者 SOD1 基因突
变特点和分布规律有一定帮助。
2、我们还成功构建了 SOD1 基因的野生型和两种突变体的真核表达质粒,为研
究中国 ALS 患者基因突变特征及探讨其发病机制奠定了基础。
关键词:家族性肌萎缩侧索硬化 SOD1 基因基因型与临床表型真核表达质
粒


















5
Molecular biological studies of SOD1 gene mutation in Chinese
patients with Familiar Amyotrophic Lateral Sclerosis

Abstract
Objective:
identificate mutation of SOD1 gene in Chinese familiar amyotrophic lateral
sclerosis patients and analyze of genotype-phenotype relationship.
we essfully constructed the eukaryotic expression plasmid of
normal and mutated SOD1 gene for the further study of amyotrophic lateral sclerosis
pathogenesis.
Methods:
polymerase chain reaction and DNA sequencing techniques, probands of 8
amyotrophic lateral sclerosis families were screened for SOD1 mutation.
analyses of the FALS families.
, Gly147Asp and wild type SOD1cDNA/,SOD1cDNA/
PEGP/N2 eukaryotic expression plasmid were constructed by restriction endonuclease,
T4 DNA ligase and site-directed mutag