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DNA测序技术.ppt

文档分类：高等教育 | 页数：约32页举报非法文档有奖

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DNA测序技术》》吴子君*DNA测序技术第一代DNA测序技术第二代DNA测序技术第三代DNA测序技术第四代DNA测序技术1、第一代DNA测序技术传统的化学降解法、双脱氧链终止法以及在它们的基础上发展来的各种DNA测序技术。第一代DNA测序技术包括:化学降解法、双脱氧链终止法和荧光自动测序技术。、化学降解法基本原理:利用特异的选择性试剂,专一性的随机断裂DNA成不同长短的片段。根据试剂的选择性及片段在高分辨力的聚丙烯酰***凝胶电泳上的区带位置,判断DN***段末端核苷酸的种类,从而测出DNA的序列。将双链DNA样品变为单链↓每个单链的同一方向末端都用放射性同位素标记,以便显示DNA条带↓分别用不同方法处理,获得只差一个核苷酸的降解DNA群体↓电泳,、化学降解法---、双脱氧链终止法(Sanger法)原理:利用DNA聚合酶,以待测单链DNA为模板,以dNTP为底物,设立四种相互独立的测序反应体系,在每个反应体系中加入不同的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)作为链延伸终止剂。在测序引物引导下,按照碱基配对原则,每个反应体系中合成一系列长短不一的引物延伸链,通过高分辨率的变性聚丙烯酰***凝胶电泳分离,放射自显影检测后,从凝胶底部到顶部按5′→3′方向读出新合成链序列,由此推知待测模板链的序列。、双脱氧链终止法(Sanger法)、双脱氧链终止法(Sanger法)Sanger法因操作简便,得到广泛的应用。后来在此基础上发展出多种DNA测序技术,其中最重要的是荧光自动测序技术。

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