实验设计方案.....doc

实验设计方案一、过氧化物酶活性(愈创木酚法)仪器:分光光度计,离心机,研钵,容量瓶,量筒,试管,吸管溶液:(),,2%H2O2,20%三***乙酸(TCA)步骤:1、,切碎,放入研钵中。加适量的磷酸缓冲液研磨成匀浆。将匀浆液全部转入离心管中,于3000rmp离心10min,上清液转入50mL容量瓶中。沉淀雍适量磷酸缓冲液再提取两次,上清液并入容量瓶中,定容至刻度,低温下保存备用。2、,2%,,。用加热煮沸5min的酶液为对照,反应体系加入酶液后,立即与37℃水浴中保温15min,然后迅速转入冰浴中,并加入20%三***,5000r/min离心10min,按测定浓度调节吸收倍数稀释,470nm波长下测定吸光度。二、过氧化氢酶(CAT)活性仪器:研钵,离心机、250mL容量瓶,移液管,10mL试管3支,恒温水浴锅,               分光光度计试剂:(内含1%聚乙酸吡咯烷***),(使用前用高锰酸钾标准溶液标定)步骤:1、-3mL4℃下预冷磷酸缓冲液中冰浴研磨成匀浆,移至25mL容量瓶中,并多次冲洗,合并,再定容。混匀后4℃静置10min,取上清液10000r/min4℃离心15min,取上清液作为酶待测液,4℃保存。2、取10mL试管3支,其中一支为对照管,按表顺序加入试剂。管号s0s1s2酶液/..    将s0号管在沸水浴煮1min以杀死酶液,冷却。将所有试管在25℃下预热后,,每管加完立即计时,并迅速倒入比色皿中,240nm下测定吸管度值,每1min钟读一次值,共4次,全部测完后,计算酶活性。三、NBT法测定SOD活力仪器:离心机,分光光度计,日光灯,试管试剂:(),130mmol/L甲硫氨酸(Met)溶液,750μmol/LNBT溶液,100μmol/LEDTA-Na2液,20μmol/L核黄素1、,加1mL预冷的磷酸缓冲液在冰浴上研磨成浆加缓冲液使终体积为5mL。-2mL于4000r/min下离心10min,取上清。2、取四支5mL透明度好的指形管,按下表加入溶液:试剂(酶)用量/mL(比色时) 130mmol//L100μmol/LEDTA-.0μmol/     混匀后将1支对照管置于暗处,、反应结束后,以不照光的对照管做空白,分别测定其他各管的吸光度