实验十 植物染色体标本的制备和观察..ppt

实验十植物染色体标本的制备和观察一实验目的掌握常规压片法和去壁低渗法制备植物染色体标本的基本原理和方法。二实验原理常规压片法仍是当今观察植物染色体常用的方法,其程序包括取材、预处理、固定、解离、染色和压片等步骤。但压片法的不足之处是染色体很难分散开,染色体容易变形和断裂。去壁低渗法是借助纤维素酶和果胶酶将细胞间的果胶质和组成细胞壁的α-纤维素、半纤维素溶解掉,使植物细胞只有质膜,然后按哺乳类动物染色体标本制备的方法——低渗、火焰干燥法制备植物染色体标本。三实验仪器、材料和试剂1仪器、用具:培养箱、显微镜等2材料:蚕豆种子3试剂:⑴秋水仙素⑵磷酸缓冲液⑶甲醇、冰醋酸⑷改良苯酚品红染色液⑸混合酶液三实验仪器、材料和试剂3试剂:⑹70%、85%、95%乙醇⑺1mol/LHCL四实验方法(压片法制备染色体标本)1取材把蚕豆种子预先浸泡6小时,然后转入垫有湿润滤纸的培养皿中,置25℃温箱中发芽,幼根长至1~2cm左右,于上午13~。%秋水仙素溶液中,浸泡处理4小时。3固定用水洗净处理过的根尖,经甲醇-冰醋酸(3∶1)固定6~24小时,再经95%、85%酒精各半小时,最后转入70%酒精中,4℃保存备用。四实验方法(压片法制备染色体标本)4解离取出根尖,用蒸馏水洗净,放入1NHCl中60℃解离8~10min,再用蒸馏水洗净。5染色改良苯酚品红染色液染色5~10min。6压片把根尖放在载玻片上,切取分生区部分,加一滴染液,用镊子捣碎,盖上盖玻片,然后在盖玻片上放上一滤纸,用铅笔上的橡皮头轻轻敲打盖片,使细胞和染色体分散。7镜检。四实验方法(去壁法制备染色体标本)℃温箱中发芽,待根长到1~2cm时使用。%秋水仙素溶液处理3~4小时。,经甲醇/冰醋酸(3∶1)固定2-24小时,换入70%酒精保存。四实验方法(去壁法制备染色体标本),用蒸馏水洗净,放入1NHCl中60℃解离14~15min,再用蒸馏水洗净5染色改良苯酚品红染色液染色5-10min。6漂洗漂洗液换洗2-3次,每次1-2min。7酶解切取着色深的分生区放到小杯中,加入混合酶液(%纤维素酶+%果胶酶),25℃下酶解2~4小时。四实验方法(去壁低渗法制备染色体标本),用蒸馏水慢慢冲洗2次,然后加入45%醋酸。9压片吸取材料,置于载玻片,盖上盖玻片,然后在盖玻片上放上一滤纸,用铅笔上的橡皮头轻轻敲打盖片,使细胞和染色体分散。10镜检五作业绘出植物中期细胞染色体图。