软骨修复用水凝胶的制备和性能研究..doc

软骨修复用水凝胶的制备和性能研究    在软骨修复中,支架为细胞和组织生长提供适宜的环境。水凝胶的结构和天然软骨的细胞外基质相似,并可通过微创注射等方法来实现组织修复,因此是用于软骨修复和再生的一类非常重要的材料。我们利用光引发聚合的方法制备了可注射型水凝胶并在水凝胶中引入微载体、生物大分子、生长因子等,研究了水凝胶的结构与性能。针对软骨组织的特点,进一步设计了仿生化的水凝胶。这些工作对软骨的修复与再生用水凝胶支架的设计和制备有重要意义。在本课题组以前的工作基础上,水溶性可交联聚合的壳聚糖(CML)通过在壳聚糖上依次接枝甲基丙烯酸(MA)和乳酸(LA)制得。光引发剂(Irgacure2959)在特定波长(365nm)的紫外光作用下引发CML在水溶液中聚合,制备了可注射型壳聚糖水凝胶。水凝胶的凝胶时间从分钟到几十分钟,%时,对凝胶时间影响较大,%引发剂来制备水凝胶。干态的水凝胶吸收水分后可以溶胀到原重量几十到一百多倍。当交联密度较高、pH较高、溶液中有二价阴离子时,水凝胶的平衡溶胀比较低。-7kPa,损耗模量在10-100Pa。交联密度较高的水凝胶,储能模量和损耗模量也相对较高,在含溶菌酶的PBS中降解相对较慢。体外软骨细胞的培养表明由Irgacure2959引发形成的水凝胶的细胞毒性小于由过硫酸铵/四甲基乙二胺(APS/TEMED)引发形成的水凝胶的细胞毒性。为了促进水凝胶中软骨细胞的生长,将明胶引入CML水凝胶中,用光聚合的方法制备了含明胶的CML水凝胶。以明胶分子为模板研究了生物大分子在CML水凝胶中的释放行为。随着明胶的交联程度增大、含量增加,水溶液的pH增大,从CML水凝胶中释放出的明胶相对含量减少。在20℃下从CML水凝胶中释放出的明胶相对含量比37℃下少。另外,溶液中的离子和氨基酸等也会影响明胶的释放。明胶的包埋也会影响CML水凝胶的结构与性能。如随着明胶含量的增大,水凝胶的网孔尺寸变小,平衡溶胀比降低,对水凝胶的粘弹性和水凝胶的降解性能也有一定的影响。体外软骨细胞培养发现CML水凝胶中的明胶一定程度上可以促进软骨细胞的生长和细胞外基质的分泌;随着培养时间的延长,软骨细胞在CML水凝胶中逐渐向下迁移。通过MA的接枝成功地合成了可共价交联的明胶(GM),并通过光引发聚合的方法制备了可注射型明胶水凝胶。明胶接枝MA后分子量分布变宽,zeta电位升高。光照20min后,固体核磁的结果显示GM化学凝胶中不存在未反应的双键。通过差示扫描量(?)仪(DSC)表征了明胶接枝前后的物理溶胶-凝胶转变点,MA的接枝、聚合物浓度等会影响其熔融温度和熔融焓。圆二色谱(CD)证实了明胶中存在三螺旋结构,改性后三螺旋结构的含量减少。随着聚合物浓度增加,水凝胶的凝胶时间缩短、平衡溶胀比降低、储能模量和损耗模量增加、平均网孔尺寸减小。我们还将TGF-β1包埋在明胶水凝胶中,研究了软骨细胞在水凝胶中的生长。体外软骨细胞的培养表明GM水凝胶可以支持软骨细胞生长和保持软骨细胞的表型;TGF-β1能促进软