HPLC分离条件的优化步骤以及定量计算公式的选择.ppt

、分离度与基本色谱分离方程式1、分离度——柱的总分离效能指标柱效参数:标准偏差():(W1/2):色谱峰高一半处的宽度W1/2=峰底宽(W):W=4=,色谱图中两个相邻色谱峰达到基线分离开;R=,表明两个相邻组分只有94%分离开。(最低指标)分离度表达式:役率衔捡肇霓喊伎埃奥咆粕痢乙绢吐酷害窑咙楞矾僵涨谎宏是梁播伴褥矛HPLC分离条件的优化步骤以及定量计算公式的选择HPLC分离条件的优化步骤以及定量计算公式的选择R=n1/2/4•(α-1)/α•k2′/(1+k2′)R受热力学因素[容量因子k′和选择性系数α(α=k2′/k1′)]和动力学因素(理论塔板数n)两个方面控制。若相邻两峰的峰底宽近似相等,令W2=W1=W,引入相对保留值和塔板数,分离度公式演变为下式:、、:以15cm为佳,可解决80%的样品分析,柱效应大于50000。特殊样品用特定的柱子不同柱子其保留性差异很大,相同条件,不同柱子比例会不一样。不同色谱柱需合适的pH范围,-,有的色谱柱比较耐碱,kromasil可以到10,而杂化xterra在1-12,XDB在pH3-,容量因子k′是一个非常重要的参数,对如何选择流动相的溶剂组成、改善多组分分离的选择性都发挥着重要的作用。k′=t′R/tMt′R=tR-tM在HPLC分析中,死时间表示了一个在高效液相色谱固定相上未被滞留组分的保留时间。=Lπr2εT/F式中,L为柱长,cm;r为柱内径半径,cm;F为流动相体积流速,cm3/s;εT为总孔率,,对化学键和固定相、,。死时间tM的测量比较困难,有以下几种方法:=ΦηL2/△pdp2式中,Φ为阻抗因子;η为流动相的动力黏度;L为柱长;△p为柱压力降;≥10时,可按下述公式计算tM:tM=L/u对全多孔固定相u==3F/