课题3　血红蛋白的提取和分离.doc

《课题3血红蛋白的提取和分离》导学案一、学****目标本课题尝试对血液中血红蛋白的提取和分离,使学生能够体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法,并了解色谱法,电泳法等分离生物大分子的基本原理,为今后学****运用这些技术打下基础。二、重点凝胶色谱法的原理和方法三、难点样品的预处理;色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。【先知先悟】一、:也称做;是根据分离蛋白质的有效方法。(1)由构成的凝胶,内部有许多贯穿的的。(2)当不同的蛋白质通过凝胶时,相对分子质量的蛋白质容易进入凝胶内部的通道,路程,移动速度,而相对分子质量的蛋白质无法进入凝胶内部的通道,只能在移动,路程,移动速度,从而使不同的蛋白质分子得以分离。二、:在一定范围内,抵制的对溶液pH的影响,维持pH。:由种缓冲剂溶解于中配制而成,通过调节缓冲剂的就可以得到不同pH范围内使用的缓冲液。三、:指在电厂的作用下发生的过程。:在一定的下,、等生物大分子的可解离基团会带上或,在的作用下,这些带电分子会向着与其所带电荷的电极移动。:电泳利用了待分离样品中各种分子的差异及分子本身的、的不同,使带电分子产生不同的,从而实现样品中的分离。:常用的电泳方法有和。测定蛋白质分子量时通常使用。四、:通过、、等操作收集血红蛋白溶液。(1)红细胞的洗涤:目的是。分离时采取,直至上清液中没有,表明红细胞已洗涤干净。(2)血红蛋白的释放:在和的作用下,红细胞破裂,释放出血红蛋白。(3)分离血红蛋白溶液:把离心后,将试管中的液体用过滤、除去,于中静置片刻后,分离出下层的。:即透析(1)方法:将血红蛋白溶液装入,将放入一定量适宜浓度的中,透析。(2)目的:将的杂质除去。(3)原理:透析袋能使小分子自由进出,而将大分子物质保留在袋内。:通过凝胶色谱柱将相对分子质量较大的杂质蛋白除去。操作如下:(1)凝胶色谱柱的制作。(2)凝胶色谱柱的装填①材料:本实验使用的是。②方法:凝胶用充分溶胀后。配成,一次性倒人色谱柱内。不能有存在;不能发生流干露出凝胶颗粒的现象。(3)样品的加入和洗脱①:加样前,打开流出口,使柱内凝胶面上的缓慢下降到与平齐,关闭出口。:用小心地将1mL透析后的样品加到的顶端,注意不要破坏。:打开下端出口,使样品渗入内。②洗脱:加入,打开下端出口,进行。:在鉴定的方法中,使用最多的是。五、:、与十分重要。过少,无法除去血浆蛋白;过高和过长会使等一同沉淀,达不到分离效果。:商品凝胶使用前需直接放在中膨胀,可以将加入其中的用加热,加速膨胀。:在装填凝胶柱时,不得有气泡存在。气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的,降低。:如果红色区带地移动,说明色谱柱制作成功。【探究归纳】一、人们用鸡的红细胞提取DNA,而用人成熟的红细胞提取血红蛋白的原因是什么?二、洗涤红细胞时为什么不能用蒸馏水代替生理盐水?三、在血红蛋白释放过程中。加入蒸馏水和甲苯的目的是什么?四、凝胶色谱法的原理归纳【典例导练】类型一凝胶色谱法分离蛋白质【例l】凝胶色谱技术是一种快速而又简单的分离技术,由于设备简单、操作方便,不需要有机溶剂,对高分子物质有