课题3　血红蛋白的提取和分离.pptx

课题3血红蛋白的提取和分离一、基础知识(一)蛋白质提取和分离的原理(二)蛋白质提取和分离的方法1、凝胶色谱法(分配色谱法)2、电泳法(三)缓冲溶液二、实验操作——蛋白质的提取和分离根据蛋白质的物理化学性质差异:、(一)思考:蛋白质的种类多种多样,进行蛋白质提取与分离的原理是什么?1、凝胶色谱法(分配色谱法)小分子穿过多孔凝胶颗粒的内部,路程长,流动慢;大分子通过多孔凝胶颗粒的间隙,路程短,流动快。凝胶是由多糖类化合物(如葡聚糖或琼脂糖)构成的多孔小球体,内部有许多贯穿的通道。根据分离蛋白质的方法。(1)概念:(2)材料:(3)原理:(二)蛋白质提取和分离的方法相对分子质量的大小洗脱:从色谱柱上端不断注入缓冲液,促使蛋白质分子的差速流动。混合物上柱洗脱大分子流动快小分子流动慢收集大分子收集小分子2、电泳法(2)原理:带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。(1)电泳:①许多重要的生物大分子,如多肽、核酸等都具有可解离的基团,在一定的PH下,这些基团会带上正电或负电。②在电场的作用下,这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。③电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小,形状的不同使带电分子产生不同的迁移速度,从而实现样品中各种分子的分离。(二)蛋白质提取和分离的方法电泳原理示意图思考:影响蛋白质分子运动速度的因素决定运动方向电场作用力形成阻力决定运动速率电荷性质电荷量分子形状分子大小√√√√√√√(3)常见电泳方法有哪些?琼脂糖凝胶电泳和聚丙稀酰***凝胶电泳(4)实例通常使用:十二烷基磺酸钠(SDS)—聚丙稀酰***凝胶电泳测定蛋白质分子量。①应用