酵母蔗糖酶的提取及其性质的研究.doc

酵母蔗糖酶的提取及其性质的研究袁某某(西北农林科技大学陕西杨凌)[摘要]采用自溶法从酵母中提取蔗糖酶,即在一定PH和适当的温度下,利用组织细胞内自身的酶系统将细胞破碎再通过乙醇的分级与透析,得到纯化的酵母蔗糖酶。本实验也通过考马斯亮蓝G250染色法,测定蔗糖酶的活力和蛋白质浓度,对蔗糖酶的性质进行了研究。[关键词]蔗糖酶,分离提取,酶活力,蛋白质含量1引言自1860年Bertholet从啤酒酵母(ycesCerevisiae)中发现了蔗糖酶以来,它已被广泛地进行了研究。蔗糖酶(invertase)(β-D-呋喃果糖苷果糖水解酶)()特异地催化非还原糖中的β-呋喃果糖苷键水解,具有相对专一性。不仅能催化蔗糖水解生成葡萄糖和果糖,也能催化棉子糖水解,生成蜜二糖和果糖。、DEAE纤维束DE-23、-HCL缓冲液、牛血清蛋白、考马斯亮蓝G-250、葡萄糖、水杨酸、.,少量多次地加入50ml蒸馏水,搅拌均匀,、25ml乙酸乙酯,搅匀,再于35℃恒温水浴中搅拌30min。抽提补加蒸馏水30ml,搅匀,盖好,于35℃恒温过夜,8000r/min离心10min,弃沉淀及脂层,的粗级分Ⅰ。预先将恒温水浴调到50℃,将盛有粗体级分Ⅰ的离心管稳妥地放入水浴中,不断轻摇离心管保存30min。取出离心管,于并于中迅速冷却,4℃,10000r/min,离心10min。取上清液,量出体积,(称为热级分Ⅱ)。将热级分Ⅱ转入小烧杯中,放入冰盐浴,逐滴加入等体积预冷至-20℃的95%乙醇,同时轻轻搅拌30min,再冰盐浴10min,以沉淀完全。4℃,10000r/min,离心10min,弃去上清液,并滴干,沉淀保存于离心管中,盖上盖子,然后将其放入冰箱中冷冻保存,即醇级分Ⅲ。,通过测定反应后样品中还原糖的量来确定酶活力。(1)标准曲线的制作 取做好编号的试管,按下表进行实验。管号01234567891020mmol/L葡萄糖/.,流水冷却,                       (2)反应时间的影响取做好编号的试管,按下表进行实验。...         由加酶开始计时蔗糖酶/.