荧光光度法测定硫酸奎尼丁含量.doc

实验三 荧光光度法测定硫酸奎尼丁含量实验目的和要求:;;(标准曲线法);。实验原理:硫酸奎尼丁结构分为喹啉环和喹啉碱两个部分,根据其喹啉环结构部分具有产生荧光的特性,采用荧光光度计测量其荧光强度,可实现硫酸奎尼丁含量的测定。实验仪器与试剂: (100μg/ml) ()       ::按照下表配制硫酸奎尼丁标准系列溶液及样品溶液编号123456(硫酸奎尼丁样品溶液)100μg/,—       :以5号溶液作为测定溶液,置于荧光光度计样品室中,盖上样品室舱盖,改变荧光波长,测定荧光强度,比较最大荧光强度。调节灵敏度值,使最大荧光强度读数在100左右。确定测定灵敏度。,用1cm石英荧光比色皿,以5号溶液作为测定溶液,置于荧光光度计样品室中,盖上样品室舱盖,然后按照下表依次调节荧光波长,测定荧光强度;以测定的荧光强度为纵坐标,荧光波长为横坐标制图,绘制荧光光谱,并从荧光光谱曲线上找出最大荧光波长。(激发波长为365nm)荧光波长(nm):λ=440nm          绘制的荧光光谱如下::将荧光波长调节为上面实验选择的λmax,荧光光度计灵敏度为上面实验选择的灵敏度档次;用1cm石英荧光比色皿,,置于荧光光度计样品室中,盖上样品室舱盖。然后按照下表依次测定标准系列溶液和样品溶液荧光强度,平行测定三次,计算荧光强度的平均值;以荧光强度的平均值为纵坐标,系列标准溶液的浓度为横坐标制图,绘制标准曲线。编号123456空白溶液(F0)(F-F0)        绘制的标准曲线如下:实验数据处理::根据6号样品溶液荧光强度测定的平均值,在标准曲线上采用作图法求出其对应的浓度值,采用下式计算样品溶液