荧光光度法测定硫酸奎尼丁含量.doc

荧光光度法测定硫酸奎尼丁含量
实验目的和要求:
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(标准曲线法);
。
实验原理:
硫酸奎尼丁结构分为喹啉环和喹啉碱两个部分,根据其喹啉环结构部分具有产生荧光的特性,采用荧光光度计测量其荧光强度,可实现硫酸奎尼丁含量的测定。
实验仪器与试剂:
(100μg/ml)
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5. 50ml容量瓶6个 6. 5ml移液管2只
7. 1cm石英荧光比色皿1个
实验步骤:
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以5号溶液作为测定溶液,置于荧光光度计样品室中,盖上样品室舱盖,改变荧光波长,测定荧光强度,比较最大荧光强度。调节灵敏度值,
使最大荧光强度读数在100左右。确定测定灵敏度。

将荧光波长调节为380nm,用1cm石英荧光比色皿,以5号溶液作为测定溶液,置于荧光光度计样品室中,盖上样品室舱盖,然后按照下表依次调节荧光波长,测定荧光强度;以测定的荧光强度为纵坐标,荧光波长为横坐标制图,绘制荧光光谱,并从荧光光谱曲线上找出最大荧光波长。(激发波长为365nm)
绘制的荧光光谱如下:
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将荧光波长调节为上面实验选择的λmax,荧光光度计灵敏度为上面实验选择的灵敏度档次;用1cm石英荧光比色皿,,置于荧光光度计样品室中,盖上样品室舱盖。然后按照下表依次测定标准系列溶液和样品溶液荧光强度,平行测定三次,计算荧光强度的平均值;以荧光强度的平均值
绘制的标准曲线如下:
实验数据处理:
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根据6号样品溶液荧光强度测定的平均值,在标准曲线上采用作图法求出其对应的浓度值,采用下式计算样品溶液中硫酸奎尼丁的含量:
Cx=c读取值×
=×
=
实验讨论:
,在实验刚开始的时候,选择的灵敏度太小,五号溶液不同的荧光波长下荧光强度的最大值也只有二十几,所以重新选择了一档较高的灵敏度。