课题3　血红蛋白的提取和分离.pptx

学****导航 “基础知识”,掌握蛋白质分离的方法凝胶色谱法的原理、缓冲液的制备及作用和蛋白质纯度鉴定的方法电泳法的原理。“实验操作”,掌握蛋白质提取和分离的过程。“操作提示”,掌握蛋白质分离过程中需注意的问题。重难点击 ,体验提取生物大分子的基本过程和方法。、电泳法等分离生物大分子方法的基本原理。一、蛋白质的分离技术当堂检测二、实验操作和操作提示内容索引一、,如分子的形状和、所带的性质和多少、溶解度、和对其他分子的亲和力等,可以用来分离不同种类的蛋白质。(1)概念:也称做,是根据分离蛋白质的有效方法。大小电荷吸附性质分配色谱法相对分子质量的大小(2)凝胶的特点(3)常用凝胶:或琼脂糖。(4)分离原理①相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道,路程,移动速度,通过凝胶的时间。②相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道,只能在凝胶_____移动,路程,移动速度,通过凝胶的时间。形态:微小的_________组成:大多数由构成结构:(1)作用:在一定范围内,缓冲溶液能够抵制对溶液pH的影响,维持pH基本不变。(2)配制:通常由1~2种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的_____就可以制得的缓冲液。(3)意义:为了能够在实验室条件下准确模拟生物体内的过程,保持_____与体内环境中的pH基本一致。(1)概念:带电粒子在的作用下发生的过程。(2)原理①带电粒子:许多重要的生物大分子,如多肽、核酸等都具有的基团,在一定的pH下,这些基团会带上。②迁移动力与方向:在电场的作用下,带电分子会向着与其_____________的电极移动。③分离依据:电泳利用了待分离样品中各种分子以及分子本身的、的不同,使带电分子产生,从而实现样品中各种分子的分离。(3)常用的电泳方法:电泳和电泳。电场迁移可解离正电或负电所带电荷相反带电性质的差异大小形状不同的迁移速度琼脂糖凝胶聚丙烯酰***(1)结合右图,根据凝胶色谱法的分离原理,填表分析不同大小的分子洗脱后的次序。相对分子质量大相对分子质量小直径大小__________运动方式_____________无规则的扩散运动运动路程较短_____运动速度_____较慢洗脱次序先流出后流出较大较小垂直向下运动较长较快答案相对分子质量较小的蛋白质由于扩散作用进入凝胶颗粒内部,而被滞留;相对分子质量较大的蛋白质被排阻在凝胶颗粒外面,在颗粒之间迅速通过。(2)结合右图,分析为什么相对分子质量较大的蛋白质会先从色谱柱中洗脱出来?答案不能。相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶颗粒内部,移动距离较近,移动速度较快,先洗脱出来;但相对分子质量较小的蛋白质可能进入凝胶颗粒内部,也可能不进入,导致部分相对分子质量较小的蛋白质可能与相对分子质量较大的蛋白质一起洗脱出来。(3)凝胶色谱法分离蛋白质时通过一次洗脱能否将所需蛋白质与其他杂质彻底分离?答案答案各种分子应带有不同种类和不同量的电荷。(1)从电荷方面思考,适合电泳法分离的各种分子需具备什么条件?答案答案否。因为SDS能与蛋白质结合,形成蛋白质-SDS复合物,SDS它所带负电荷的量远大于蛋白质分子原有的电荷量,因而掩盖了不同蛋白质间的电荷差异,使电泳迁移率完全由蛋白质分子的大小决定。(2)SDS-聚丙烯酰***凝胶电泳分离蛋白质是否依据蛋白质所带电荷的差异?为什么?