课题3　血红蛋白的提取和分离.pptx

课题3血红蛋白的提取和分离血红蛋白只存在于红细胞内,含有四条肽链,每条肽链环绕一个亚铁血红素基团,此基团可携带一分子氧或一分子二氧化碳,血红蛋白因含有血红素而呈红色。血红蛋白两个α-肽链两个β一肽链四个亚铁血红素基团血红蛋白的特点:Fe2+一、基础知识:1、分离生物大分子的基本思路是什么?本课题我们将利用血红蛋白与杂质蛋白哪方面的差异进行提纯?选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。2、蛋白质提取与分离的依据:不同种类蛋白质的物理化学性质不同:蛋白质形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、对其他分子亲和力等千差万别。从而分离不同种类的蛋白质。一、基础知识--蛋白质提取和分离原理提取分离方法凝胶色谱法凝胶电泳法3、分离不同的蛋白质方法:2、原理:1、材料---实际上就是一些微小的多孔球体。,如葡聚糖、琼脂糖。凝胶(一)凝胶色谱法(分配色谱法):根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法当相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时,相对分子质量较小的蛋白质:容易进入凝胶颗粒内部的通道,路程较长,移动速度较慢;而相对分子质量较大的蛋白质:无法进入凝胶颗粒内部的通道,只能在凝胶外部间隙中移动,路程较短,移动速度较快。3、具体过程:一、基础知识---蛋白质分离和提取的原理分子量大小直径大小运动方式运动速度运动路径洗脱次序一、基础知识---蛋白质分离和提取的原理大于凝胶颗粒孔隙直径,被阻挡在颗粒的外面小于凝胶颗粒孔隙直径,可以进入颗粒内部垂直向下移动垂直向下移动,无规则扩散进入颗粒内部较快较慢较短较长先从凝胶柱洗脱出来后从凝胶柱洗脱出来1、什么是缓冲液?2、缓冲液的作用是什么?【思考2】:(二)、缓冲溶液-在一定的范围内,凡是能够抵制外加少量强酸或强碱的影响使原来溶液PH值基本保持不变的混合溶液。由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成。如H2CO3/NaHCO3,醋酸/醋酸钠,NaH2PO4/Na2HPO4等能够抵制外界的酸和碱对溶液PH值的影响,维持PH基本不变。洗脱剂3、缓冲液是如何配制的?4、本实验加的是什么缓冲液?为何要加缓冲液?通常由1-2种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同pH范围内使用的缓冲液。磷酸缓冲液在本课题中使用的缓冲液是:__________,其目的是:利用缓冲液模拟细胞内的pH环境,保证血红蛋白的正常结构和功能,便于观察(红色)和科学研究(活性):(三).①许多重要的生物大分子,如多肽、核酸等都具有可解离的基团,在一定的PH下,这些基团会带上正电或负电。②在电场的作用下,这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。③电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小,形状的不同,使带电分子产生不同的迁移速度,从而实现样品中各种分子的分离。